[發明專利]一種基于回折crRNA的超短鏈miRNA檢測方法及系統

在審

• 申請號: 202310091133.3
• 申請日: 2023-01-13
• 公開（公告）號: CN116287129A
• 公開（公告）日: 2023-06-23
• 發明（設計）人: 劉翼振;陳勇;張奕濱
• 申請（專利權）人: 深圳大學
• 主分類號: C12Q1/6816
• 分類號: C12Q1/6816;C12Q1/6876;C12N15/113
• 代理公司: 深圳市君勝知識產權代理事務所(普通合伙) 44268
• 代理人: 溫宏梅

1.一種基于回折crRNA的超短鏈miRNA檢測方法，其特征在于，所述的檢測方法為非診斷目的，包括步驟：

提供CRISPR/Cas13系統，所述CRISPR/Cas13系統包括CRISPR/Cas13反應體系以及Cas13蛋白；

設計針對待檢測miRNA的回折crRNA，所述回折crRNA包括通用序列、識別序列和回折序列，其中所述識別序列與待檢測miRNA的序列互補；

將待檢測miRNA以及針對待檢測miRNA的回折crRNA加入到所述CRISPR/Cas13系統中進行反應，所述回折crRNA的回折序列與待檢測miRNA形成RNA鏈；

形成的所述RNA鏈激活所述CRISPR/Cas13系統中Cas13蛋白的非特異性反式切割活性，實現信號檢出；

根據檢出的信號計算待檢測miRNA的含量。

2.根據權利要求1所述的基于回折crRNA的超短鏈miRNA檢測方法，其特征在于，所述回折序列在所述回折crRNA的3'端尾部回折。

3.根據權利要求2所述的基于回折crRNA的超短鏈miRNA檢測方法，其特征在于，所述回折序列如SEQ.ID?NO.1所示。

4.根據權利要求1所述的基于回折crRNA的超短鏈miRNA檢測方法，其特征在于，所述Cas13蛋白包括Cas13a、Cas13b、Cas13d或者Cas13X。

5.根據權利要求4所述的基于回折crRNA的超短鏈miRNA檢測方法，其特征在于，所述Cas13蛋白的反應濃度為1nM-5nM。

6.根據權利要求1所述的基于回折crRNA的超短鏈miRNA檢測方法，其特征在于，將反應體系置于實時熒光定量PCR儀中，在25℃孵育60-90min進行反應。

7.一種基于回折crRNA的超短鏈miRNA檢測系統，其特征在于，所述檢測系統包括針對待檢測miRNA的回折crRNA、Cas13蛋白以及CRISPR/Cas13反應體系；所述回折crRNA包括通用序列、識別序列和回折序列，其中，所述識別序列與待檢測miRNA的序列互補。

8.根據權利要求7所述的基于回折crRNA的超短鏈miRNA檢測系統，其特征在于，所述回折序列在所述回折crRNA的3'端尾部回折，所述回折序列如SEQ.ID?NO.1所示。

9.一種基于回折crRNA的超短鏈miRNA試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括如權利要求7-8任一所述的基于回折crRNA的超短鏈miRNA檢測系統。

10.一種基于回折crRNA的超短鏈miRNA檢測方法的應用，其特征在于，將如權利要求1-6任一所述的基于回折crRNA的超短鏈miRNA檢測方法或者如權利要求7-8任一所述的基于回折crRNA的超短鏈miRNA檢測系統應用于小于22nt的超短鏈miRNA的檢測，所述應用為非診斷目的。