[發明專利]甲基化位點作為子宮內膜異位癥分子診斷標志物的應用

有效

• 申請號: 202310087287.5
• 申請日: 2023-01-19
• 公開（公告）號: CN116144757B
• 公開（公告）日: 2023-10-03
• 發明（設計）人: 喻梅星
• 申請（專利權）人: 廣州市婦女兒童醫療中心
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11;C12Q1/6869
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 林德強

本發明公開了甲基化位點作為子宮內膜異位癥分子診斷標志物的應用。本發明發現了用于子宮內膜異位癥診斷的生物標記物，該標記物為DNA片段上的1個CpG位點，該甲基化標記物的位點為：chr4：6318317；可以通過檢測這個CpG位點的甲基化水平診斷子宮內膜異位癥，同時還能區分不同子宮內膜異位癥疾病類型。具體表現為子宮內膜異位癥患者的異位病灶組織chr4：6318317的甲基化率低于在位子宮內膜組織，并且卵巢子宮內膜異位癥患者的異位病灶組織chr4：6318317的甲基化率低于腺肌癥患者的異位病灶組織。通過ROC曲線分析發現具有非常高特異性和敏感性，具有診斷價值。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及甲基化位點作為子宮內膜異位癥分子診斷標志物的應用。

背景技術

子宮內膜異位癥是一種慢性婦科疾病，表現為子宮內膜樣組織生長于宮腔外的組織器官上。以為子宮內膜組織受激素調節呈月經周期性的增殖和脫落，從而引起局部炎癥和疼痛甚至降低孕齡期患者的受孕率。受限于現有的診斷方法，子宮內膜異位癥患者往往得不到及時的診斷，從而嚴重影響患者給治療和康復。現有影像學的檢查手段對微小的病灶檢出率低，甚至會出現漏診和誤診。現有的和已報道的子宮內膜異位癥相關標記物對于子宮內膜異位癥診斷的靈敏度和特異性均不理想，如CA125、PGP9.5、P450和尿液VDBP等。因此，急需適于子宮內膜異位癥的高靈敏度和高特異性的生物學診斷標記物。

DNA的甲基化修飾是疾病發生的早期事件之一，它能通過引起染色體構象改變來抑制基因的表達，從而疾病的發生和進展。有報道指出，異位子宮內膜組織存在異常的DNA甲基化修飾，如GATA6、GATA2和HOXA10等基因的啟動子區和編碼區。這些異常修飾的甲基化位點具備較好的特異性并且甲基化位點的甲基化率也能用熒光定量PCR(qPCR)或數字PCR(ddPCR)的手段進行檢測。因此，子宮內膜異位癥的甲基化位點具備作為疾病診斷標記物的潛力。

發明內容

本發明的目的在于提供定量檢測chr4：6318317甲基化作為生物標志物在制備診斷子宮內膜異位癥和/或子宮腺肌癥的產品中的應用。

本發明所采取的技術方案是：

本發明的第一方面，提供定量檢測chr4：6318317甲基化水平的試劑在制備診斷子宮內膜異位癥和/或子宮腺肌癥的產品中的應用。

在本發明的一些實施方式中，所述試劑包括通過甲基化特異性PCR、亞硫酸氫鹽測序法、甲基化特異性微陣列法、全基因組甲基化測序法、焦磷酸測序法、甲基化特異性高效液相層析法、數字PCR法、甲基化特異性高分辨率溶解曲線法、甲基化敏感性限制性內切酶法和熒光定量法中的至少一種方法檢測chr4：6318317甲基化水平的試劑。

在本發明的一些實施方式中，所述試劑包括引物、探針。

在本發明的一些實施方式中，所述引物的序列包括：

Primers?F：5’-GTTATAGTGTTAGGTGGAA-3’；

Primers?R：5’-CATATTCTCTTATCTCTATACA-3’。

在本發明的一些實施方式中，所述探針的序列包括：

probes?M：5’-GTTTTTAAAATTCGGATAATGGA-3’；

probes?NM：5’-GTTTTTAAAATTTGGATAATGGA-3’。

在本發明的一些實施方式中，所述探針的5’端連接有熒光報告基團，所述探針的3’端連接有淬滅基團。

在本發明的一些優選實施方式中，所述報告基團選自FAM、ROX、VIC、HEX、TET、JOE、NED、Cy5、Cy3。