[發明專利]PRiME HLB-高效液相色譜-串聯質譜法測定獸藥制劑中β-內酰胺類含量的方法

在審

• 申請號: 202310080796.5
• 申請日: 2023-02-07
• 公開（公告）號: CN116203152A
• 公開（公告）日: 2023-06-02
• 發明（設計）人: 王敬;張海超;于趁;賈海濤;張婧雯;郄俊青;黃雪靜;劉寶如
• 申請（專利權）人: 石家莊海關技術中心
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 北京睿智保誠專利代理事務所(普通合伙) 11732
• 代理人: 劉曉靜

本發明屬于獸藥制劑質量檢測技術領域，本發明提供了PRiMEHLB?高效液相色譜?串聯質譜法測定獸藥制劑中β?內酰胺類含量的方法。本發明是將待測樣品中的β?內酰胺類藥物用乙腈?甲醇提取，經PRiMEHLB固相萃取柱凈化、稀釋后，用液相色譜?串聯質譜儀檢測，基質外標法定量。本發明方法簡單便于操作，且測定結果準確，方法重復性好，精敏度和靈敏度高。本發明可定量測定獸藥制劑中β?內酰胺類藥物的含量，為建立獸藥制劑的質量評價提供了依據。

技術領域

本發明涉及獸藥制劑質量檢測技術領域，尤其涉及PRiME?HLB-高效液相色譜-串聯質譜法測定獸藥制劑中β-內酰胺類含量的方法。

背景技術

β-內酰胺是指一類含有四元內酰胺環的有機結構。β-內酰胺結構常出現在抗生素中，包括青霉素及其衍生物、頭孢菌素、單酰胺環類、碳青霉烯和青霉烯類酶抑制劑等以及新發展的頭霉素類、硫霉素類、單環β-內酰胺類等其他非典型β-內酰胺類抗生素。基本上所有在其分子結構中包括β-內酰胺核的抗生素均屬于β內酰胺類抗生素。它是抗生素中使用廣泛的一類。

β內酰胺類藥物在獸醫臨床上應用十分廣泛，主要用來治療動物的呼吸道、胃腸道和尿道等感染和乳房炎等，其特點是抗菌性強、毒性低、品種多、抗菌范圍廣、適應癥廣等。但由于這類藥物有嚴重地過敏反應和細菌耐藥性及菌群失調等問題，再加上使用時不遵守休藥期，導致藥物殘留超標，藥物就會通過食物鏈影響人類的飲食健康。

獸藥制劑是傳統獸醫學的重要組成部分，具有多方位調節和治療作用，可提高動物機體的免疫力和抗應激能力，同時還能促進生產性能的發揮，并有效降低體內的藥物殘留，從而滿足日益嚴格的食品安全需求。但是一些不法獸藥生產企業受經濟利益的驅使，在獸藥制劑中非法添加該類化學藥物。由于這種添加往往是隱形的，雖然可能增強藥效，但存在與其他藥物配伍使用時出現藥量疊加導致中毒的風險和藥物殘留的隱患。

目前抗生素的檢測方法主要有高效液相色譜法、毛細管電泳法、免疫分析法、液相色譜-質譜聯用法等。檢測樣本種類較多，包括食品(牛乳、雞蛋、肉類、魚及水產品等)、保健品、生物樣本(血、尿等)和環境樣本(土壤、水等)等。目前，國家相關檢測標準方法主要涉及乳及乳制品、動物源性食品、生活飲用水和飼料等，并沒有適用于獸藥制劑中β-內酰胺類藥物測定的標準和檢測方法，而獸藥制劑中β-內酰胺類藥物檢測標準的缺乏也造成了藥品安全監測的盲區。由于獸藥制劑成分復雜，提取和分離困難，基質干擾的物質多，一般的飼料、動物組織中的化學成分分析方法難以直接用于獸藥制劑的分析。因此，需要建立一種簡單、快速、準確的測定獸藥制劑中β-內酰胺類藥物的方法，對規范獸藥制劑產業，保證用藥質量安全，維護人民生命健康，擴大對外貿易，加強獸藥制劑的安全檢測監督具有十分重要的意義，能為打擊在獸藥制劑中β-內酰胺類藥物的違法使用提供強有力的技術支持。

發明內容

為克服現有技術中存在的上述缺陷，本發明提供了PRiME?HLB-高效液相色譜-串聯質譜法測定獸藥制劑中β-內酰胺類含量的方法。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了PRiME?HLB-高效液相色譜-串聯質譜法測定獸藥制劑中β-內酰胺類含量的方法，包括如下步驟：

(1)將待測樣品與乙腈-甲醇溶液混合，依次進行振蕩提取、離心，得上清液；

(2)將上述所得上清液轉移到PRiME?HLB固相萃取柱，控制流速為1～2mL/min，收集濾液；

(3)將上述所得濾液用甲酸水溶液稀釋定容，將定容后的濾液過0.2～0.8μm濾膜，得供試品溶液；

(4)分別將不同種類的β-內酰胺類藥物標準品用乙腈-水溶液溶解并定容，得標準品溶液；