[發明專利]PRiME HLB-高效液相色譜-串聯質譜法測定獸藥制劑中β-內酰胺類含量的方法

在審

• 申請號: 202310080796.5
• 申請日: 2023-02-07
• 公開（公告）號: CN116203152A
• 公開（公告）日: 2023-06-02
• 發明（設計）人: 王敬;張海超;于趁;賈海濤;張婧雯;郄俊青;黃雪靜;劉寶如
• 申請（專利權）人: 石家莊海關技術中心
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 北京睿智保誠專利代理事務所(普通合伙) 11732
• 代理人: 劉曉靜

1.PRiMEHLB-高效液相色譜-串聯質譜法測定獸藥制劑中β-內酰胺類含量的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)將待測樣品與乙腈-甲醇溶液混合，依次進行振蕩提取、離心，得上清液；

(2)將上述所得上清液轉移到PRiMEHLB固相萃取柱，控制流速為1～2mL/min，收集濾液；

(3)將上述所得濾液用甲酸水溶液稀釋定容，將定容后的濾液過0.2～0.8μm濾膜，得供試品溶液；

(4)分別將不同種類的β-內酰胺類藥物標準品用乙腈-水溶液溶解并定容，得標準品溶液；

(5)分別對上述所得供試品溶液和標準品溶液進行液相色譜-串聯質譜儀測定，若供試品溶液的參考保留時間與標準品溶液的參考保留時間偏差在±2.5％之間；且供試品溶液中組分定性離子的相對豐度與濃度接近的標準品溶液中對應的定性離子的相對豐度進行比較，當相對離子豐度＞50％時，相對偏差在±20％之間，或當相對離子豐度為20～50％時，相對偏差在±25％之間，或當相對離子豐度為10～20％時，相對偏差在±30％之間，或當相對離子豐度≤10％時，相對偏差在±50％之間，則說明供試品溶液中存在對應的β-內酰胺類待測物，可用于進行下一步測定，否則說明供試品溶液中不存在對應的β-內酰胺類待測物；

(6)按照公式X＝(A×V₁×V₃)/(A_S×V₂×m×1000)×C計算待測樣品中β-內酰胺類待測物的含量，其中，X為待測樣品中待測物的含量，單位為mg/kg，A為供試品溶液中待測物的峰面積，A_S為標準品溶液中待測物的峰面積，C為標準品溶液中待測物的質量濃度，單位為ng/mL，V₁為步驟(1)中提取溶劑總體積，單位為mL，V₂為步驟(3)中用于稀釋濾液的體積，單位為mL，V₃為步驟(3)中濾液定容后的體積，單位為mL，m為待測樣品的質量，單位為g。

2.根據權利要求1所述的PRiMEHLB-高效液相色譜-串聯質譜法測定獸藥制劑中β-內酰胺類含量的方法，其特征在于，步驟(1)中所述待測樣品與乙腈-甲醇溶液的比例為0.5～1.5g:20mL，所述乙腈-甲醇溶液中乙腈與甲醇的體積比為1～2:1～2。

3.根據權利要求1或2所述的PRiMEHLB-高效液相色譜-串聯質譜法測定獸藥制劑中β-內酰胺類含量的方法，其特征在于，步驟(1)中所述振蕩提取的頻率為110～130r/min，所述振蕩提取的時間為25～35min，所述離心的轉速為3500～4500r/min，所述離心的時間為3～7min。

4.根據權利要求3所述的PRiMEHLB-高效液相色譜-串聯質譜法測定獸藥制劑中β-內酰胺類含量的方法，其特征在于，步驟(2)中所述PRiMEHLB固相萃取柱的填料為N-乙烯基吡咯烷酮-二乙烯苯共聚物。

5.根據權利要求4所述的PRiMEHLB-高效液相色譜-串聯質譜法測定獸藥制劑中β-內酰胺類含量的方法，其特征在于，步驟(3)中所述甲酸水溶液的體積濃度為0.05～0.15％，所述濾液與定容后的濾液的體積比為1:1.5～2.5。

6.根據權利要求5所述的PRiMEHLB-高效液相色譜-串聯質譜法測定獸藥制劑中β-內酰胺類含量的方法，其特征在于，步驟(4)中所述β-內酰胺類藥物標準品與乙腈-水溶液的比例為1～2mg:1～2mL，所述乙腈-水溶液中乙腈與水的體積比為1～2:1～2。

7.根據權利要求6所述的PRiMEHLB-高效液相色譜-串聯質譜法測定獸藥制劑中β-內酰胺類含量的方法，其特征在于，步驟(5)中所述供試品溶液和標準品溶液中的母離子個數獨立為＞1，子離子個數獨立為＞2。