[發明專利]一種基于金簇-二氧化錳納米片的農藥熒光免疫分析法

在審

• 申請號: 202310069711.3
• 申請日: 2023-02-07
• 公開（公告）號: CN116400067A
• 公開（公告）日: 2023-07-07
• 發明（設計）人: 李紅霞;呂婷;王博旭;蘇長順;胡亞楠;王荷蕊;孫春燕
• 申請（專利權）人: 吉林大學重慶研究院
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N33/533
• 代理公司: 長春市恒譽專利代理事務所(普通合伙) 22212
• 代理人: 李榮武

1.一種基于金簇-二氧化錳納米片的農藥熒光免疫分析法，其特征在于，其步驟如下：

A.AuNCs-MnO₂復合材料的制備：

取HAuCl₄·4H₂O和BSA在37℃靜置溫育10min，隨后將二者按體積比1:1混合，劇烈攪拌5min后，將NaOH相比于上述混合溶液體積比1:20加入上述溶液中，在37℃下持續劇烈攪拌12h，將得到的黃色AuNCs溶液放入1kDa透析袋中提純，將提純的AuNCs溶液與超純水按照體積比1:3.9混合，在室溫下溫和攪拌5min，隨后，將MnCl₂·4H₂O相比于上述混合溶液1:98加入到上述溶液中，溫和攪拌1h，之后，將NaOH相比于上述混合溶液體積比1:99加入上述溶液中，溫和攪拌4h，得到棕色AuNCs-MnO₂溶液，最后，用1kDa透析袋純化AuNCs-MnO₂溶液，純化后的AuNCs溶液與棕色AuNCs-MnO₂復合溶液需要在4℃下保存，

B.堿性磷酸酶催化活性的研究：

通過堿性磷酸酶與L-抗壞血酸-2-磷酸三鈉鹽的催化反應生成抗壞血酸，抗壞血酸可以還原MnO₂納米片變為Mn²⁺，恢復AuNCs熒光，產生熒光信號變化，對酶催化活性進行研究，將L-抗壞血酸-2-磷酸三鈉鹽與不同濃度的ALP按體積比2:1混合，并在37℃孵育30min，然后將上述溶液、Tris-HCl緩沖液和AuNCs-MnO₂溶液以3:1:2的比例混合，在37℃孵育10min后，將上述混合物與超純水按照3:7比例混合，混合后，利用熒光分光光度計進行熒光測量，

C.檢測殺螟硫磷的熒光免疫分析法：

用碳酸鹽緩沖液將包被抗原稀釋至1μgmL^-1，于96孔板上包被抗原100μL/孔，4℃孵育過夜，用PBST洗滌3次后，每孔加入300μL牛血清白蛋白，37℃封閉96孔板60min，用PBST洗滌3次后，將Nb-FNT-ALP和不同濃度的FNT按照1:1的比例加入到存在包被抗原的96孔板中，37℃孵育90min后，繼續用PBST沖洗3次，然后，在37℃下將超純水和L-抗壞血酸-2-磷酸三鈉鹽按照1:2的比例加入96孔板中，并反應30min，隨后，將上述溶液、Tris-HCl緩沖液和AuNCs-MnO₂溶液以3:1:2的比例混合，在37℃靜置10min，然后，將得到的溶液移到1.5mL離心管中，并與超純水按照3:7的比例混合，測量熒光值，

D.食品實際樣品中農藥水平監測分析：

準備了7種樣品：自來水、松花江水、蘋果、大白菜、生菜、大米和番茄，來評估本發明在實際食品樣品中檢測農藥的能力，除水樣外，均質樣品加入FNT標準溶液，上述樣品加入乙腈和水5:1混合的提取緩沖液，振搖60min后，向離心管中加入NaCl，渦旋混合上述物質5min，讓其沉淀分離，靜置30min后，從樣品中提取上清液，并采用建立的熒光免疫分析方法進行檢測，這之后，種植兩盆小白菜，一盆作為空白對照，另一盆從種植后第8天開始，連續2天，每天噴灑1次10mL?FNT標準物，末次噴灑后，待小白菜表面干燥，用前述方法從小白菜的根和葉中提取FNT，然后，用本發明監測小白菜中FNT的降解水平。

2.如權利要求1所述的一種基于金簇-二氧化錳納米片的農藥熒光免疫分析法，其特征在于，步驟A所述的AuNCs的整個合成過程在37℃下進行，AuNCs-MnO₂的整個合成過程在室溫下進行。

3.如權利要求1所述的一種基于金簇-二氧化錳納米片的農藥熒光免疫分析法其特征在于，步驟A所述的HAuCl₄.4H₂O濃度為10mmol?L^-1，BSA濃度為50mg?mL^-1，NaOH濃度為1molL^-1，MnCl₂.4H₂O濃度為50mmol?L^-1。