[發明專利]一種PEG-G5.NH2-FITC-DOTA(Gd)-Monalizumab/IPH4301納米探針及其應用

在審

• 申請號: 202310053351.8
• 申請日: 2023-01-31
• 公開（公告）號: CN116019937A
• 公開（公告）日: 2023-04-28
• 發明（設計）人: 李康安;王梓霖;郭鑫宇;嵇再雄
• 申請（專利權）人: 上海市第一人民醫院
• 主分類號: A61K49/10
• 分類號: A61K49/10;A61K49/16;A61K49/12;G01N24/08
• 代理公司: 上海卓陽知識產權代理事務所(普通合伙) 31262
• 代理人: 巫蓓麗

本發明涉及一種PEG?G5.NH2?FITC?DOTA(Gd)?Monalizumab/IPH4301納米探針及其應用，對制備的納米探針進行表征，通過流式細胞術分析納米材料和NK?92MI細胞的結合能力和應用MRI對納米探針標記的NK?92MI細胞體外成像并分析其T1加權(T1WI)的信號改變，還采用Westernblot檢測共培養后乳腺癌MDA?MB?231細胞凋亡相關蛋白的表達以及Elisa法檢測培養體系內的IFN?γ的表達量，發現本發明的PEG?G5.NH2?FITC?DOTA(Gd)?Monalizumab/IPH4301納米探針能夠結合NK?92MI細胞，利用3.0TMRI可對其進行體外成像，并在Monalizumab和IPH4301雙抗體修飾后納米探針促進了NK?92MI細胞釋放IFN?γ，且增強了其對MDA?MB?231細胞的殺傷能力，為生物體內成像和免疫治療提供實驗依據。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體地說，是關于一種PEG-G5.NH2-FITC-DOTA(Gd)-MonalizumabIPH4301納米探針及其應用。

背景技術

腫瘤免疫治療是通過調動機體自身的免疫系統對腫瘤細胞進行殺傷和清除的生物學治療方法，查點治療是通過采用共抑制分子或配體的拮抗劑以及其他藥物來阻斷信號通路，解除腫瘤患者受體1(programmed?cell?death?1receptor,PD-1)和細胞毒T淋巴細胞相關抗原-4(cytotoxic?Tlymphocyte-associated?antigen-4,CTLA-4)應用較為廣泛，而且針對PD-1/PD-L1(programmeddeath-ligand1)的單克隆抗體治療方法已經在多種實體瘤的治療中取得顯著臨床進展。近年來的研究表明，自然殺傷細胞(Natural?killer?cells,NKs)作為天然免疫系統中的主要效應細胞，在控制腫瘤的發生發展進程中發揮重要作用，是腫瘤免疫治療中極具潛力的研究對象。NK細胞通過其表面表達的殺傷功能相關調節型受體，包括活化型受體和抑制型受體，對惡性轉化的細胞進行免疫監視，維持機體穩態。其中活化型受體NKG2D及其對應的配體構成應激誘導的危險檢測系統，可對癌變細胞作出直接反應，在腫瘤免疫監視中起決定性作用。

NK細胞是一種效應淋巴細胞，在機體抵抗腫瘤過程中發揮了至關重要的作用。NK細胞無需預先致敏，能夠通過分泌細胞因子促進免疫應答，快速溶解靶細胞^[1]。臨床研究和動物實驗發現，NK細胞功能缺陷或者NK細胞受損均會導致各類癌癥發病率增高^[2]。NK細胞表面存在著諸多受體，它們能夠傳遞各種激活信號或者抑制信號，它們之間的平衡受到嚴格的調節，以此調節相關的免疫功能并維持平衡^[3]。分子影像通過組織固有特性或使用特異性分子探針來在分子和解剖水平可視化細胞或者亞細胞單位，它不僅展示了細胞或者亞細胞的生理和病理生理過程，也通過分子影像將此過程特征化、量化，實現腫瘤診療一體化。因此構建一種能夠結合NK細胞，并且能用于生物體內成像和免疫治療的探針極為重要。

中文專利CN111991564A，公開日2020.08.26，公開了一種結合于NK92細胞的靶向納米探針及其制備方法和應用。合成了靶向于NK92細胞的Fe3O4-PEG-CD56/Avastin@Ce6納米探針，其是在超順磁性Fe3O4納米粒子表面共價連接靶向NK細胞的抗CD56抗體以及抗腫瘤藥物貝伐珠單抗，再于表面物理吸附光敏劑Ce6。所述探針可用于熒光和磁共振雙模態成像，生物相容性、穩定性好，可用于活體長時間監測，且在體內外均表現出優異的抗腫瘤效果和生物安全性，為NK細胞作用機制的研究和免疫治療奠定了基礎。而目前關于本發明的一種PEG-G5.NH2-FITC-DOTA(Gd)-MonalizumabIPH4301納米探針及其應用還未見報道。

發明內容

本發明的第一個目的是，針對現有技術中的不足，提供一種探針。

本發明的第二個目的是，提供探針的用途。

為實現上述第一個目的，本發明采取的技術方案是：