[發(fā)明專利]一種PEG-G5.NH2-FITC-DOTA(Gd)-Monalizumab/IPH4301納米探針及其應用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202310053351.8
• 申請日: 2023-01-31
• 公開（公告）號: CN116019937A
• 公開（公告）日: 2023-04-28
• 發(fā)明（設計）人: 李康安;王梓霖;郭鑫宇;嵇再雄
• 申請（專利權）人: 上海市第一人民醫(yī)院
• 主分類號: A61K49/10
• 分類號: A61K49/10;A61K49/16;A61K49/12;G01N24/08
• 代理公司: 上海卓陽知識產權代理事務所(普通合伙) 31262
• 代理人: 巫蓓麗

1.一種PEG-G5.NH2-FITC-DOTA(Gd)-Monalizumab/IPH4301納米探針，其特征在于，所述的納米探針由以下步驟制備而成：

a)將G5.NH2溶解于1ml的DMSO中，同時將DOTA-NHS溶解于4ml的超純水中在攪拌的情況下逐滴加入到G5.NH2溶液中，于室溫下磁力攪拌反應24h后，加入溶解在1ml水中Gd(NO3)3·6H2O，置于室溫下持續(xù)攪拌反應24h以此來螯合Gd(Ⅲ)離子，將混合的反應物用纖維素透析膜在蒸餾水中透析1天，得到G5.NH2-DOTA(Gd)溶液；

b)將PEG_2K-COOH溶解在5ml的DMSO中，逐滴加入溶解在2mlDMSO中的EDC，并在室溫下進行磁力攪拌反應半小時，加入溶解在2ml超純水中的NHS-sulfo，并在室溫下持續(xù)攪拌活化3小時；

c)將活化后的PEG2K-COOH逐滴加入步驟a)得到的G5.NH2-DOTA(Gd)，置于室溫下磁力攪拌反應24h。將混合的反應物用纖維素透析膜在蒸餾水中透析1天，得到PEG-G5.NH2-DOTA(Gd)；

d)將FITC溶解于1ml的DMSO中，逐滴加入上述得到的PEG-G5.NH2-DOTA(Gd)中，隨后將兩者混勻置于室溫下磁力攪拌反應24小時，將混合的反應物用纖維素透析膜在蒸餾水中透析24h，得到靶向納米探針(NPs)PEG-G5.NH2-DOTA(Gd)-FITC；

e)將SMCC溶解于1ml的DMF中，隨后加入0.1M磷酸鹽緩沖液稀釋至1mg/ml。將上述混合液分別加入至Monalizumab、IPH4301抗體內，置于室溫下反應1h，然后使用超濾管純化獲得的產物；

f)使用Traut‘s試劑在靶向納米探針表面引入巰基，將10倍于伯胺基團數量Traut‘s試劑溶解在0.1M磷酸鹽緩沖液中。在PH＝8.0、N₂的條件下持續(xù)反應1h，并通過超濾管提純產物。將活化后的Monalizumab、IPH4301單克隆抗體與修飾后的NPs以1：100的摩爾比進行反應，得到最終產物NPS-Monalizumab/IPH4301。

2.根據權利要求1所述的納米探針，其特征在于，所述制備步驟a)中的G5.NH2、DOTA-NHS以及Gd(NO₃)₃·6H₂O加入的量分別為28.8mg、15.24mg以及27.1mg。

3.根據權利要求1所述的納米探針，其特征在于，所述制備步驟b)中PEG2K-COOH、EDC以及NHS-sulfo加入的量分別為50mg、2.9mg以及3.3mg。

4.根據權利要求1所述的納米探針，其特征在于，所述制備步驟d)中的FITC加入的量為2.4mg。

5.根據權利要求1所述的納米探針，其特征在于，所述制備步驟e)和f)中的磷酸鹽緩沖液規(guī)格為pH7.6，含5mMEDTA。

6.根據權利要求1所述的納米探針，其特征在于，所述制備步驟e)中的超濾管規(guī)格為MW＝30000，所述步驟f)中的超濾管的規(guī)格為MW＝3000。

7.根據權利要求1所述的納米探針，其特征在于，所述的納米探針可與NK-92MI細胞結合。

8.權利要求1-7任一所述的納米探針在制備細胞影像探針中的應用。

9.權利要求1-7任一所述的納米探針在制備抗腫瘤藥物中的應用。