[發明專利]內含肽Wir Gp071變體、編碼基因及其在制備九肽-1中的應用在審

申請號：	202310050462.3	申請日：	2023-02-01
公開（公告）號：	CN115960851A	公開（公告）日：	2023-04-14
發明（設計）人：	陳西朋;張志乾;吳奕瑞;張豫;吳嵩;劉麗花;何茜;許波;江翱	申請（專利權）人：	態創生物科技（廣州）有限公司;廣州市乾相生物科技有限公司
主分類號：	C12N9/02	分類號：	C12N9/02;C12N15/53;C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;C12N1/21;C07K7/06;C07K1/22;C12R1/19
代理公司：	蘇州根號專利代理事務所(普通合伙) 32276	代理人：	項麗
地址：	510275 廣東省廣州市海珠區新港西路13***	國省代碼：	廣東;44
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摘要：
搜索關鍵詞：	內含 wir gp071 變體編碼基因及其制備中的應用
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【說明書】：

本發明公開了一種內含肽Wir?Gp071，其氨基酸序列如SEQ?ID?No.1所示。還公開了內含肽Wir?Gp071變體，其氨基酸序列如SEQ?ID?No.3所示，還公開了其編碼基因以及在制備九肽?1中的應用。本發明中提供了一種新的內含肽Wir?Gp071序列及內含肽Wir?Gp071變體序列，可將其與九肽?1組成融合蛋白，表達獲得高純度的無修飾九肽?1。本發明中的九肽?1可以基于內含肽Wir?Gp071?九肽?1重組表達載體得到，其制備方法簡單，僅需經過細胞破碎、內含肽切割等簡單的步驟，就可以高效地獲得高純度的九肽?1，且構建成功后可持續生產，產出量大，適用于九肽?1的大規模工業化量產，具有較大的市場價值。

技術領域

本發明涉及一種內含肽Wir?Gp071變體、編碼基因及其在制備九肽-1中的應用，屬于蛋白表達技術領域。

背景技術

九肽-1是一種仿生肽，它與黑色素細胞上的MC1受體有非常好的匹配性，因此可以作為促黑色素細胞激素的對抗劑，競爭性的與MC1受體結合，阻止酪氨酸酶進一步被激活而產生黑色素。九肽-1競爭性的封閉黑色素母細胞上受體與各種因子信號的入口，弱化了黑色素母細胞的活性，減少黑色素產生量，從而起到均勻和提亮膚色的效果，因此九肽-1具有重要的市場應用價值。但是，目前九肽-1的工業化合成主要依賴于化學合成，這種合成方法副產物多、產率低、污染大、成本高，難以滿足“碳中和”的時代需求。而且，采用化學合成會帶來很多合成副產物，有些副產物甚至具有較大的細胞毒性，從而使得九肽-1的生產和提純消耗大量的成本，且容易帶來嚴重的污染，極大地限制了九肽-1的進一步開發與應用。生物合成可以有效解決化學合成的缺陷，具有產率高、成本低和節能環保等優點。但對于復雜結構的九肽-1，目前并沒有高效的生物合成途徑。因此，開發一種更加綠色經濟且高效的合成方式，是九肽-1工業化生產所急需的。

發明內容

本發明公開了一種內含肽Wir?Gp071變體，其氨基酸序列如SEQ?ID?No.3所示。

上述的內含肽變體的編碼基因。

優選的，其核苷酸序列如SEQ?ID?No.4所示。

本發明還公開了上述的內含肽Wir?Gp071變體在制備九肽-1中的應用。

本發明還公開了一種內含肽Wir?Gp071變體-九肽-1融合蛋白，含有SEQ?ID?No.3所示的氨基酸序列以及九肽-1的氨基酸序列，所述九肽-1的氨基酸序列為MPFRWPKPV。

優選的，其氨基酸序列如SEQ?ID?No.5所示。

優選的，還包括修飾序列，所述修飾序列包括his標簽序列、GST標簽序列、Flag標簽序列、Halo標簽序列、HA標簽序列、Myc標簽序列、Snap標簽序列中的至少一種。

上述的內含肽Wir?Gp071變體-九肽-1融合蛋白的編碼基因，其DNA序列如SEQ?IDNo.6所示。

本發明還公開了上述的內含肽Wir?Gp071變體-九肽-1融合蛋白的表達載體。

優選的，所述表達載體為PET28a。

優選的，所述表達載體的核苷酸序列如SEQ?ID?No.7所示。