[發(fā)明專利]內(nèi)含肽Wir Gp071變體、編碼基因及其在制備九肽-1中的應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202310050462.3
• 申請(qǐng)日: 2023-02-01
• 公開（公告）號(hào): CN115960851A
• 公開（公告）日: 2023-04-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳西朋;張志乾;吳奕瑞;張?jiān)?/a>;吳嵩;劉麗花;何茜;許波;江翱
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 態(tài)創(chuàng)生物科技（廣州）有限公司;廣州市乾相生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N9/02
• 分類號(hào): C12N9/02;C12N15/53;C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;C12N1/21;C07K7/06;C07K1/22;C12R1/19
• 代理公司: 蘇州根號(hào)專利代理事務(wù)所(普通合伙) 32276
• 代理人: 項(xiàng)麗

1.一種內(nèi)含肽Wir?Gp071變體，其特征在于其氨基酸序列如SEQ?ID?No.3所示。

2.權(quán)利要求1所述的內(nèi)含肽Wir?Gp071變體的編碼基因。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的編碼基因，其特征在于其核苷酸序列如SEQ?ID?No.4所示。

4.權(quán)利要求1所述的內(nèi)含肽Wir?Gp071變體在制備九肽-1中的應(yīng)用。

5.一種內(nèi)含肽Wir?Gp071變體-九肽-1融合蛋白，其特征在于含有SEQ?ID?No.3所示的氨基酸序列以及九肽-1的氨基酸序列，所述九肽-1的氨基酸序列為MPFRWPKPV。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的內(nèi)含肽Wir?Gp071變體-九肽-1融合蛋白，其特征在于其氨基酸序列如SEQ?ID?No.5所示。

7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的內(nèi)含肽Wir?Gp071變體-九肽-1融合蛋白，其特征在于還包括修飾序列，所述修飾序列包括his標(biāo)簽序列、GST標(biāo)簽序列、Flag標(biāo)簽序列、Halo標(biāo)簽序列、HA標(biāo)簽序列、Myc標(biāo)簽序列、Snap標(biāo)簽序列中的至少一種。

8.權(quán)利要求6所述的內(nèi)含肽Wir?Gp071變體-九肽-1融合蛋白的編碼基因，其特征在于其DNA序列如SEQ?ID?No.6所示。

9.權(quán)利要求5-7中任一項(xiàng)所述的內(nèi)含肽Wir?Gp071變體-九肽-1融合蛋白的表達(dá)載體。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的表達(dá)載體，其特征在于所述表達(dá)載體為PET28a。

11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的表達(dá)載體，所述表達(dá)載體的核苷酸序列如SEQ?ID?No.7所示。

12.權(quán)利要求5-7中任一項(xiàng)所述的內(nèi)含肽變體-九肽-1融合蛋白的表達(dá)宿主菌。

13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的表達(dá)宿主菌，其特征在于所述表達(dá)宿主菌為大腸桿菌。

14.一種九肽-1的制備方法，其特征在于其步驟包括：

(1)構(gòu)建權(quán)利要求9-11中任一項(xiàng)所述的表達(dá)載體；

(2)將表達(dá)載體轉(zhuǎn)化到大腸桿菌宿主菌；選出陽性克隆；

(3)培養(yǎng)陽性克隆，誘導(dǎo)內(nèi)含肽Wir?Gp071變體-九肽-1融合蛋白的表達(dá)；

(4)表達(dá)產(chǎn)物置于層析柱中進(jìn)行內(nèi)含肽切割，收集流通液即為九肽-1。

15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的九肽-1的制備方法，其特征在于步驟(4)具體為：

4.1收集陽性克隆的菌體細(xì)胞并進(jìn)行細(xì)胞破碎，離心，取細(xì)胞破碎后的上清液，過濾除去菌體碎片；

4.2過濾后的上清液過Ni-NTA親和層析柱；

4.3Ni-NTA親和層析柱中加入磷酸緩沖液混勻后室溫孵育過夜，收集流通液，即得純化后的九肽-1。

16.根據(jù)權(quán)利要求14所述的九肽-1的制備方法，其特征在于所述磷酸緩沖液為pH?6.0，濃度50mM的磷酸緩沖液。

17.一種內(nèi)含肽Wir?Gp071，其特征在于其氨基酸序列如SEQ?ID?No.1所示。

18.權(quán)利要求17所述的內(nèi)含肽Wir?Gp071的編碼基因。

19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的編碼基因，其特征在于其核苷酸序列如SEQ?ID?No.2所示。

20.權(quán)利要求17所述的內(nèi)含肽Wir?Gp071變體在制備九肽-1中的應(yīng)用。