[發明專利]一種糖尿病腎病預測模型的建構、判斷方法及其試劑盒

在審

• 申請號: 202310048915.9
• 申請日: 2023-02-01
• 公開（公告）號: CN116487052A
• 公開（公告）日: 2023-07-25
• 發明（設計）人: 徐延勇;吳慧娟;張志剛;石佼玉;徐旭東;賀海東;胡屏
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: G16H50/50
• 分類號: G16H50/50;G01N33/533;G16H50/20;G16H50/80
• 代理公司: 上海恒慧知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 31317
• 代理人: 張革

1.一種糖尿病腎病預測模型的判斷方法，其特征在于，步驟包括：

采集樣本；

進行第一清洗步驟，將所述樣本利用第一洗劑進行清洗；

對已進行所述第一清洗步驟的所述樣本進行免疫熒光標記；

進行第二清洗步驟，將已進行所述免疫熒光標記的所述樣本利用第二洗劑進行清洗；以及

成像步驟，對已清洗的所述免疫熒光標記的所述樣本進行成像以得到相應的圖像，由所述圖像計算所述樣本中的目標物的數量。

2.如權利要求1所述的糖尿病腎病預測模型的判斷方法，其特征在于，所述進行第一清洗步驟包括：

將所述樣本浸入所述1/2第一洗劑中；

將浸有所述樣本的所述1/2第一洗劑倒掉，添加新的第一洗劑并進行振蕩，接著于所述振蕩步驟之后更換新的第一洗劑；以及

以48小時的時間為間隔更換浸有所述樣本的所述第一洗劑3次。

3.如權利要求1或2所述的糖尿病腎病預測模型的判斷方法，其特征在于，在將所述樣本浸入所述第一洗劑之前還包括將所述樣本利用磷酸鹽緩沖生理鹽水(PBS，phosphatebuffered?saline)進行清洗。

4.如權利要求1或2所述的糖尿病腎病預測模型的判斷方法，其特征在于，所述第一洗劑由尿素、四羥丙基乙二胺、曲拉通X-100(Triton?X-100)及雙蒸水(doubledistilledwater，ddH₂O)組成，1/2第一洗劑由第一洗劑和雙蒸水配制而成。

5.如權利要求1所述的糖尿病腎病預測模型的判斷方法，其特征在于，在對已進行所述第一清洗步驟的所述樣本進行所述免疫熒光標記的步驟包括：

利用第一緩沖液對所述樣本進行清洗3次，將所述樣本利用第一緩沖液振蕩清洗2小時之后再利用新的第一緩沖液振蕩清洗8小時以上，然后利用另一新的第一緩沖液對所述樣本振蕩清洗2小時

將所述樣本浸入一級抗體；

利用第二緩沖液對所述樣本每隔兩小時進行振蕩清洗且清洗四次，然后利用第二緩沖液將所述樣本振蕩清洗8小時以上；

將所述樣本浸入二級抗體，并進行振蕩72小時；以及

利用第三緩沖液對所述樣本每隔兩小時進行振蕩清洗且清洗四次，然后利用第三緩沖液將所述樣本振蕩清洗8小時以上，以完成對所述樣本進行所述免疫熒光標記；

所述第一緩沖液、所述第二緩沖液及所述第三緩沖液為磷酸鹽緩沖生理鹽水(PBS，phosphate?buffered?saline)；

所述一級抗體由足細胞核標記物WT-1抗體、足細胞漿標記物synaptopodin抗體與抗體稀釋溶液配制而成，所述二級抗體由紅色熒光耦合抗體、綠色熒光耦合抗體及所述抗體稀釋溶液配制而成。

所述一級抗體稀釋溶液及所述二級抗體稀釋溶液是由曲拉通X-100(Triton?X-100)、牛血清蛋白(bovine?serum?albumin)及含有疊氮化鈉溶液(sodium?azide?solution)的PBS緩沖液所配制而成。

6.如權利要求1所述的糖尿病腎病預測模型的判斷方法，其特征在于，所述進行第二清洗步驟包括：

將所述樣本浸入1/2第二洗劑，并在溫度為37℃的環境條件下振蕩24小時直至所述樣本沉入容器的底部為止；

倒掉所述1/2第二洗劑，再添加新的第二洗劑，并在溫度為37℃的環境條件下振蕩8小時以上；以及

以24小時的時間為間隔更換浸有樣本的第二洗劑3次；

所述第二洗劑是由尿素、蔗糖、三乙醇胺(triethanolamine)、以及雙蒸水(doubledistilled?water，ddH2O)所組成，1/2第二洗劑是由所述第二洗劑和PBS緩沖液按照1:1的體積比例配制而成。

7.一種糖尿病腎病預測模型的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括清洗樣本的第一洗劑及第二洗劑以及對所述樣本進行免疫熒光標記的一級抗體及二級抗體，使得所述試劑盒通過計數在所述樣本中于成像后的目標物數量，以判斷糖尿病腎病預測模型是否建構成功。