[發明專利]一種穩定敲除METTL7B基因的腦膠質瘤重組細胞及其構建方法

在審

• 申請號: 202310047003.X
• 申請日: 2023-01-31
• 公開（公告）號: CN115896037A
• 公開（公告）日: 2023-04-04
• 發明（設計）人: 宋惠彬;馬磊;鄒暢;王繼剛;毛捷;劉東成;鐘富花;張思雨;田瓔
• 申請（專利權）人: 深圳市人民醫院
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/54;C12N15/85;C12N15/113
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 朱翠玲

本發明公開了一種穩定敲除METTL7B基因的腦膠質瘤重組細胞及其構建方法，屬于基因工程技術領域。本發明要結解決的技術問題是：如何構建METTL7B敲除的腦膠質瘤細胞模型。為解決該技術問題，本發明提供一種重組細胞，所述重組細胞不含有METTL7B蛋白的編碼基因或所述METTL7B蛋白的表達量降低或所述METTL7B蛋白的活性降低，所述METTL7B蛋白為氨基酸序列是SEQ?ID?No.1的蛋白質。本發明還提高該重組細胞的構建方法。本發明獲得的重組細胞為人METTL7B蛋白功能和作用機制的研究提供了可用的細胞模型，不僅為研究其分子機制，還對發現其作為新型的藥物靶標和藥物發現提供重要的研究工具。

技術領域

本發明基因工程技術領域，具體涉及一種穩定敲除METTL7B基因的腦膠質瘤重組細胞及其構建方法。

背景技術

腦膠質瘤(Glioma)是源自神經上皮腫瘤的統稱，是最常見的顱內腫瘤，占顱腦腫瘤的40％～50％，是最常見的原發性顱內腫瘤，其惡性率是全身腫瘤的2％～3％，年發病率為3～8人/10萬人口。腦膠質瘤可分為低級別膠質瘤和高級別膠質瘤。高級別膠質瘤具有迅速性侵襲生長、血管不正常增生、容易破壞腦組織等生物學特性，這使得惡性膠質瘤治療難度大，且預后較差，經過系統治療后其中位生存時間仍少于15個月。目前，對于腦膠質瘤的治療仍以手術切除為主，術后輔以放化療。但因短時間的復發和耐藥性，治療效果不滿意。因此，腦膠質瘤防治形勢依然非常嚴峻。因此，探索腦膠質瘤發生和發展的分子機制，對于深入了解其發病機制，以及疾病的防控和治療都非常關鍵。

METTL7B(methyltransferase?like?7B)是甲基化轉移酶樣家族成員之一，其蛋白結構包含一個S-腺苷基甲硫氨酸結合域(S-adenosylmethionine?binding?site,SAMbinding?site)。METTL7B參與多種惡性腫瘤的侵襲及遷移的調控。METTL7B參與乳腺癌細胞的基因組穩定性和腫瘤侵襲。METTL7B能通過促進腫瘤上皮細胞向間質細胞的轉變途徑，從而導致甲狀腺癌細胞侵襲和遷移的發生。最新研究表明，METTL7B在腦膠質瘤組織中較其他成員表達升高最為明顯并與生存期呈負相關。

發明內容

本發明要結解決的技術問題是：如何構建METTL7B敲除的腦膠質瘤細胞模型。

為解決上述技術問題，第一個方面，本發明提供重組細胞，所述重組細胞不含有METTL7B蛋白的編碼基因或所述METTL7B蛋白的表達量降低或所述METTL7B蛋白的活性降低，所述METTL7B蛋白為下述任一種：

A1)、氨基酸序列是SEQ?ID?No.1的蛋白質；

A2)、A1)所示的氨基酸序列經過氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加得到的與A1)所示的蛋白質具有80％以上的同一性且與METTL7B蛋白相關的蛋白質；

A3)、在A1)或A2)的N端和/或C端連接標簽得到的融合蛋白質。

其中，SEQ?ID?No.1由244個氨基酸殘基組成。

上述蛋白質可人工合成，也可先合成其編碼基因，再進行生物表達得到。

所述蛋白標簽(protein-tag)是指利用DNA體外重組技術，與目的蛋白一起融合表達的一種多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表達、檢測、示蹤和/或純化。所述蛋白標簽可為Flag蛋白標簽、His蛋白標簽、MBP蛋白標簽、HA蛋白標簽、myc蛋白標簽、GST蛋白標簽和/或SUMO蛋白標簽等。

進一步地，上述的重組細胞中，所述重組細胞按照下述的方法構建。

進一步地，上述重組細胞的受體細胞為動物細胞。

進一步地，上述重組細胞的受體細胞為人細胞。

進一步地，上述重組細胞的受體細胞為人膠質瘤細胞。