[發明專利]一種穩定敲除METTL7B基因的腦膠質瘤重組細胞及其構建方法

在審

• 申請號: 202310047003.X
• 申請日: 2023-01-31
• 公開（公告）號: CN115896037A
• 公開（公告）日: 2023-04-04
• 發明（設計）人: 宋惠彬;馬磊;鄒暢;王繼剛;毛捷;劉東成;鐘富花;張思雨;田瓔
• 申請（專利權）人: 深圳市人民醫院
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/54;C12N15/85;C12N15/113
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 朱翠玲

1.重組細胞，其特征在于：所述重組細胞不含有METTL7B蛋白的編碼基因或所述METTL7B蛋白的表達量降低或所述METTL7B蛋白的活性降低，所述METTL7B蛋白為下述任一種：

A1)、氨基酸序列是SEQ?ID?No.1的蛋白質；

A2)、A1)所示的氨基酸序列經過氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加得到的與A1)所示的蛋白質具有80％以上的同一性且與METTL7B蛋白相關的蛋白質；

A3)、在A1)或A2)的N端和/或C端連接標簽得到的融合蛋白質。

2.根據權利要求1所述的重組細胞，其特征在于：所述重組細胞按照權利要求3-7中任一所述的方法構建。

3.構建權利要求1所述的重組細胞的方法，其特征在于：所述方法包括將受體細胞中的METTL7B基因敲除獲得所述重組細胞，所述METTL7B基因為下述任一種：

g1)、編碼鏈的編碼序列是SEQ?ID?No.2所示的DNA分子；

g2)、編碼鏈的核苷酸序列是SEQ?ID?No.3所示的DNA分子；

g3)、與g1)或g2)限定的核苷酸序列具有80％或80％以上同一性，且編碼權利要求1中所述METTL7B蛋白的DNA分子。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：所述將受體細胞中的METTL7B基因敲除包括：使所述受體細胞感染慢病毒，所述慢病毒表達靶向所述METTL7B基因的gRNA和Cas9蛋白。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于：所述gRNA的靶標序列為SEQ?IDNo.4。

6.根據權利要求3-5中任一項所述的方法，其特征在于：所述將受體細胞中的METTL7B基因敲除為將所述受體細胞中的所述METTL7B基因進行如下突變：在SEQ?ID?No.3第293位和294位核苷酸之間插入了1個核苷酸T。

7.根據權利要求3-6中任一項所述的方法，其特征在于：所述受體細胞為下述任一項：

C1)、動物細胞；

C2)、哺乳動物細胞；

C3)、人細胞；

C4)、人膠質瘤細胞；

C5)、U251細胞。

8.與權利要求1所述重組細胞相關的生物材料，所述生物材料選自下述任一種：

B1)、抑制或降低權利要求書1中所述METTL7B蛋白的編碼基因的表達或權利要求1中所述METTL7B蛋白的活性的核酸分子；

B2)、含有B1)所述核酸分子的表達盒；

B3)、含有B1)所述核酸分子的重組載體、或含有B2)所述表達盒的重組載體；

B4)、含有B1)所述核酸分子的重組微生物、或含有B2)所述表達盒的重組微生物、或含有B3)所述重組載體的重組微生物。

9.根據權利要求8所述的生物材料，其特征在于：B1)所述核酸分子為靶向權利要求1所述重組細胞中的所述METTL7B基因的gRNA或所述核酸分子為表達靶向權利要求1所述重組細胞中的所述METTL7B基因的gRNA的DNA分子。

10.根據權利要求9所述的生物材料，其特征在于：所述gRNA的靶標序列為SEQ?IDNo.4。