[發明專利]一種同時檢測黑蒜中硒代蛋氨酸和硒甲基硒代半胱氨酸含量的方法

在審

• 申請號: 202310023595.1
• 申請日: 2023-01-09
• 公開（公告）號: CN116148385A
• 公開（公告）日: 2023-05-23
• 發明（設計）人: 金楠;謝寶剛;顧金蘋;王樂樂
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學;嘉興學院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/04;G01N30/06;G01N30/28;G01N30/30;G01N30/34;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 杭州合信專利代理事務所(普通合伙) 33337
• 代理人: 黃平英

本發明公開一種同時檢測黑蒜中硒代蛋氨酸和硒甲基硒代半胱氨酸含量的方法，采用超聲輔助提取法對黑蒜進行提取，得提取液；所得提取液經固相萃取后進行PITC衍生化，衍生化處理后得樣品液；對所得樣品液進行UPLC?MS檢測，經計算分別得到黑蒜中硒代蛋氨酸和硒甲基硒代半胱氨酸含量。

技術領域

本發明屬于分析檢測領域，具體涉及一種UPLC-MS(超高效液相色譜-單四級桿質譜法)結合柱前衍生化同時檢測黑蒜中硒代蛋氨酸和硒甲基硒代半胱氨酸含量的方法。

背景技術

黑蒜又名黑大蒜、發酵黑蒜，是由新鮮生蒜為原料，在高溫高壓的環境中發酵而來的大蒜深加工制品。大蒜發酵完成后，其蒜瓣變為黑褐色，刺激性氣味和辛辣感消失，口感軟糯、香甜。大量研究表明，同大蒜相比，發酵后的黑蒜生物活性增強，且多種營養物質含量增加，具有抗氧化、抗腫瘤、保護肝臟、調節血糖血脂水平、抗過敏、抗炎等生理功能。

硒是人體必需的微量元素之一，參與了人體多項生理活動過程，對人體健康十分重要。硒攝入量不足，會使人體免疫力下降，引起多種疾病，如：克山病、大骨病、地方性心肌炎等，硒過量則會導致人體中毒。因此，人體及時補充適量的硒是至關重要的。硒分為無機硒和有機硒，有機硒因低毒性、高生物活性，更適合人體吸收利用。從植物中獲取硒，是目前公認的人體攝取硒的最主要途徑。植物中的有機硒主要以硒代蛋氨酸和硒甲基硒代半胱氨酸的形式存在。黑蒜因含硒而成為大眾青睞的補硒食物之一，因此能夠快速準確檢測黑蒜中硒代蛋氨酸和硒甲基硒代半胱氨酸的含量，可以為黑蒜質量和安全性評價提供重要參考依據。

目前，硒代蛋氨酸、硒甲基硒代半胱氨酸的檢測方法主要有氣相色譜-質譜法、液相色譜-原子熒光光譜法、高效液相色譜-電感耦合等離子體質譜法。目前，尚未見黑蒜中硒代蛋氨酸和硒甲基硒代半胱氨酸PITC衍生化檢測的方法。

發明內容

本發明提供一種同時檢測黑蒜中硒代蛋氨酸和硒甲基硒代半胱氨酸含量的方法，本發明擬通過優化提取、萃取、衍生化條件參數，建立一種基于柱前PITC衍生化的高效液相色譜-單四級桿質譜法，同時快速檢測黑蒜中硒代蛋氨酸和硒甲基硒代半胱氨酸含量，并對5個不同產地黑蒜中硒代蛋氨酸和硒甲基硒代半胱氨酸含量進行分析，為黑蒜質量提供參考依據。

一種同時檢測黑蒜中硒代蛋氨酸和硒甲基硒代半胱氨酸含量的方法，包括：

(1)將黑蒜去皮、均勻碾壓成泥狀后真空干燥；取干燥后的黑蒜并按比例加入甲醇水溶液，充分混勻后在20～50℃下超聲10～40min；離心分離后取上清液；

(2)將所得上清液經固相萃取并以甲醇水溶液進行洗脫，收集所有洗脫液；將所得洗脫液旋蒸濃縮后再次溶解于甲醇水溶液中，混勻后過濾取濾液(提取液)；

(3)向所得濾液(提取液)中加入內標溶液、三乙胺乙腈溶液以及PITC乙腈溶液，充分混勻后20～60℃進行衍生化反應1～3h；反應結束后取上清液于自動進樣瓶，待測；；

(4)將所得待測樣品液進行UPLC-MS檢測，記錄吸收峰面積并代入標準曲線，計算得到黑蒜中硒代蛋氨酸和硒甲基硒代半胱氨酸各自的含量。

本發明的方法，采用超聲輔助提取法對黑蒜進行提取，得提取液；所得提取液經固相萃取后進行PITC衍生化，衍生化處理后得樣品液；對所得樣品液進行UPLC-MS檢測，經計算得到黑蒜中硒代蛋氨酸和硒甲基硒代半胱氨酸含量。

可選的，步驟(1)中，所述甲醇水溶液為體積百分比為0～80％的甲醇水溶液；黑蒜與甲醇水溶液的質量體積比為1g:10～25mL。

可選的，步驟(2)中，所述甲醇水溶液為體積百分濃度為10～80％的甲醇水溶液。

可選的，步驟(1)中，所述甲醇水溶液為體積百分濃度為20％的甲醇水溶液；黑蒜與甲醇水溶液的質量體積比為1g:10mL；充分混勻后在40℃下超聲30min；步驟(2)中，所述甲醇水溶液為體積百分濃度為40％的甲醇水溶液。