[發明專利]一種同時檢測黑蒜中硒代蛋氨酸和硒甲基硒代半胱氨酸含量的方法

在審

• 申請號: 202310023595.1
• 申請日: 2023-01-09
• 公開（公告）號: CN116148385A
• 公開（公告）日: 2023-05-23
• 發明（設計）人: 金楠;謝寶剛;顧金蘋;王樂樂
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學;嘉興學院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/04;G01N30/06;G01N30/28;G01N30/30;G01N30/34;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 杭州合信專利代理事務所(普通合伙) 33337
• 代理人: 黃平英

1.一種同時檢測黑蒜中硒代蛋氨酸和硒甲基硒代半胱氨酸含量的方法，其特征在于，包括：

(1)將黑蒜去皮、碾壓成泥狀后真空干燥；取干燥后的黑蒜并按比例加入甲醇水溶液，充分混勻后在20～50℃下超聲10～40min；離心分離后取上清液；

(2)將所得上清液經固相萃取并以甲醇水溶液進行洗脫，收集所有洗脫液；將所得洗脫液旋蒸濃縮后再次溶解于甲醇水溶液中，混勻后過濾取濾液；

(3)向所得濾液中加入內標溶液、三乙胺乙腈溶液以及PITC乙腈溶液，充分混勻后20～60℃進行衍生化反應1～3h；反應結束后取上清液于自動進樣瓶，待測；

(4)將所得待測樣品液進行UPLC-MS檢測，記錄吸收峰面積并代入標準曲線，計算得到黑蒜中硒代蛋氨酸和硒甲基硒代半胱氨酸各自的含量。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，所述甲醇水溶液為體積百分比為0～80％的甲醇水溶液；黑蒜與甲醇水溶液的質量體積比為1g:10～25mL。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，所述甲醇水溶液為體積百分濃度為20％的甲醇水溶液；黑蒜與甲醇水溶液的質量體積比為1g:10mL；充分混勻后在40℃下超聲30min。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，所述甲醇水溶液為體積百分濃度為10～80％的甲醇水溶液。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，所述甲醇水溶液為體積百分濃度為40％的甲醇水溶液。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)中濾液、三乙胺乙腈溶液和PITC乙腈溶液的體積比為5:2.5:1；其中三乙胺乙腈溶液中三乙胺的濃度為1mol/L；PITC乙腈溶液中PITC的濃度為0.1mol/L。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)中，所述內標溶液為蛋氨酸-D3。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，衍生化反應的溫度20℃，衍生化反應的時間1h。

9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(4)中，檢測條件為：

色譜條件：ACOQUITYBEH?C18色譜柱；流速：0.3mL·min^-1；柱溫：45℃；進樣量：5μL；檢測波長：338nm；流動相：乙腈A-0.01％甲酸水溶液B，梯度洗脫；

質譜條件：電噴霧離子源采用負離子檢測；電噴霧毛細管電壓設定為3.0kV，氮氣用作溶劑蒸發的干燥氣體，蒸發溫度為172℃，離子傳輸管溫度為300℃，選擇性離子監測模式。