[發(fā)明專利]非洲豬瘟病毒免疫原的p49突變?nèi)诤系鞍住⒅亟M載體、工程菌及制備方法和應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202310019787.5
• 申請日: 2020-07-29
• 公開（公告）號: CN116217737A
• 公開（公告）日: 2023-06-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張強;錢泓;吳有強;徐玉蘭;姜冰潔;賈寶琴
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江海隆生物科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/70;C12N1/21;A61K39/12;A61P31/20;G01N33/569;C12R1/19
• 代理公司: 北京乾誠五洲知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11042
• 代理人: 付曉青;李廣文

1.一種非洲豬瘟病毒免疫原的p49突變?nèi)诤系鞍祝涮卣髟谟冢鰌49突變?nèi)诤系鞍诪閜49氨基酸序列中第40位的半胱氨酸(C)突變?yōu)榻z氨酸(S)的突變蛋白，其氨基酸序列如SEQ?ID?No.1所示；所述突變蛋白與硫氧還原蛋白TrxA融合，得到TrxA-p49突變?nèi)诤系鞍祝浒被嵝蛄腥鏢EQ?ID?No.2所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的p49突變?nèi)诤系鞍祝涮卣髟谟冢鯰rxA-p49突變?nèi)诤系鞍椎陌被┒嘶螋然┒诉€連接有poly-His、FLAG、c-myc、HA和poly-Arg中的一種標(biāo)簽。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的p49突變?nèi)诤系鞍祝涮卣髟谟冢瑑?yōu)化后的所述TrxA-p49突變?nèi)诤系鞍譚rxA-OPTI-p49的編碼核苷酸序列如SEQ?ID?No.4所示。

4.一種重組載體，其特征在于，所述載體為原核表達載體，其含有如權(quán)利要求3所述的編碼核苷酸序列。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的重組載體，其特征在于，所述原核表達載體選自pET30a、pBAD、pcold、pQE、pKK載體中的一種。

6.一種大腸桿菌基因的工程菌，其特征在于，所述大腸桿菌基因的工程菌含有如權(quán)利要求4或5所述的重組載體。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的大腸桿菌基因的工程菌，其特征在于，所述大腸桿菌選自C43(DE3)、C41(DE3)、BL21(DE3)、BL21?star(DE3)、arcticexpress中的一種。

8.一種非洲豬瘟病毒免疫原p49可溶性表達的制備方法，其特征在于，所述制備方法包含以下步驟：

1)將含有TrxA-p49融合蛋白的編碼基因克隆至原核表達載體中，得到含有TrxA-p49融合蛋白的編碼基因的重組質(zhì)粒；其中，所述TrxA為硫氧還原蛋白TrxA，所述p49為p49突變?nèi)诤系鞍祝浒被嵝蛄腥鏢EQ?ID?No.1所示；

2)再將步驟1)中的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至大腸桿菌細(xì)胞中，得到重組表達TrxA-p49的菌株；

3)通過培養(yǎng)、篩選、步驟2)中所述重組表達TrxA-p49的菌株，得到高度表達的菌株；

4)發(fā)酵培養(yǎng)步驟3)中所述菌株，純化后得到重組可溶性表達TrxA-p49突變?nèi)诤系鞍住?/p>

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于，步驟1)中所述原核表達載體選自pET30a、pBAD、pcold、pQE、pKK載體中的一種。

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于，步驟2)中所述大腸桿菌選自C43(DE3)、C41(DE3)、BL21(DE3)、BL21?star(DE3)、arcticexpress中的一種。

11.一種如權(quán)利要求1-3中任一項所述的p49突變?nèi)诤系鞍自谥苽浞侵挢i瘟疫苗和診斷試劑中的用途。