[發明專利]一種人乳頭瘤病毒56型L1蛋白突變體及減少重組蛋白降解的方法及應用有效
| 申請號： | 202310019679.8 | 申請日： | 2023-01-06 |
| 公開（公告）號： | CN116375816B | 公開（公告）日： | 2023-09-05 |
| 發明（設計）人： | 陳曉;伍樹明;劉永江;銀飛;張海江;姜旭林;張瑞霞;薛俊蓮;王學紅;沈邇萃 | 申請（專利權）人： | 北京康樂衛士生物技術股份有限公司 |
| 主分類號： | C07K14/025 | 分類號： | C07K14/025;C12N15/37;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京知文通達知識產權代理事務所(普通合伙) 16051 | 代理人： | 歐陽石文 |
| 地址： | 100176 北京市大興區經濟*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 乳頭 病毒 56 l1 蛋白 突變體 減少 重組 降解 方法 應用 | ||
1.一種人乳頭瘤病毒56型L1蛋白突變體，其特征在于，所述突變體的氨基酸序列為由SEQ?ID?NO：2所示核苷酸序列所編碼的氨基酸序列的第420位精氨酸替換為蘇氨酸或谷氨酰胺。
2.如權利要求1所述的突變體的編碼核酸。
3.如權利要求2所述的編碼核酸，其特征在于，所述編碼核酸的核苷酸序列為基于SEQID?NO：2所示核苷酸序列的第1258-1260位3個堿基替換為ACC；或者第1259-1260位2個堿基替換為AG。
4.含有如權利要求2或3所述的編碼核酸的表達載體。
5.如權利要求4所述的表達載體，其特征在于，其為原核表達載體。
6.如權利要求5所述的表達載體，其特征在于，其為大腸桿菌表達載體。
7.如權利要求6所述的表達載體，其為誘導表達載體。
8.如權利要求7所述的表達載體，其特征在于，出發載體為pKL1質粒。
9.如權利要求8所述的表達載體，其特征在于，其核苷酸如SEQ?ID?NO：1所示。
10.含有如權利要求4至9任一項所述的表達載體的重組菌。
11.如權利要求10所述的重組菌，其特征在于，其為原核細胞。
12.如權利要求11所述的重組菌，其特征在于，其為大腸桿菌。
13.如權利要求11所述的重組菌，其特征在于，其為大腸桿菌XA90。
14.一種制備如人乳頭瘤病毒56型L1蛋白的方法，其特征在于，包括培養如權利要求10至13任一項所述的重組菌，和分離得到人乳頭瘤病毒56型L1蛋白的步驟。
15.如權利要求14所述的方法，其特征在于，還包括純化人乳頭瘤病毒56型L1蛋白的步驟。
16.如權利要求15所述的方法，其特征在于，所述純化人乳頭瘤病毒56型L1蛋白的步驟是依次采用CHT層析柱、G25脫鹽換液層析柱、Source15Q陰離子交換層析柱和分子篩層析柱進行純化。
17.一種HPV56L1-VLP的制備方法，其特征在于，將權利要求14至16任一項所述得到的純化人乳頭瘤病毒56型L1蛋白與組裝液進行混合靜置得到；
所述組裝液為400~600mM?NaAc-HAc，2.0~5.0?M?NaCl，0.05~0.5%?Tween?80，pH4.7~6.0。
18.如權利要求17所述的制備方法，其特征在于，所述得到的純化人乳頭瘤病毒56型L1蛋白與組裝液按4：1的體積比混合，室溫靜置1?h完成組裝。
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