[發明專利]一種針對乙型肝炎病毒表面抗原突變株的單克隆抗體

有效

• 申請號: 202310015234.2
• 申請日: 2023-01-05
• 公開（公告）號: CN116199774B
• 公開（公告）日: 2023-07-14
• 發明（設計）人: 柳靜;詹先發
• 申請（專利權）人: 北京科躍中楷生物技術有限公司
• 主分類號: C07K16/08
• 分類號: C07K16/08;C07K14/02;G01N33/576;G01N33/577;G01N33/58
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本申請提供了一種針對乙型肝炎病毒表面抗原突變株的單克隆抗體。從乙肝患者血清中篩選并獲得了乙肝病毒新型突變株的HBsAg抗原序列，并將其核苷酸序列導入大腸桿菌表達載體中，制備并獲得目標抗原；利用所述HBsAg抗原免疫動物，獲得相應單克隆抗體，所述抗體能夠高特異性結合目標抗原；利用所述單克隆抗體，制備相關檢測試劑盒，該試劑盒具有高度的靈敏性和特異性。

技術領域：

本發明屬于疾病診斷和檢測領域，具體提供了一種針對乙型肝炎病毒表面抗原突變株的單克隆抗體。

背景技術：

乙型肝炎病毒(hepatitis?B，HBV)感染是一個全球公共衛生問題，15-25％的慢性感染者會因肝硬化、肝細胞癌或肝炎而發展為嚴重疾病并過早死亡。世界衛生組織(TheWorld?Health?Organization，WHO)估計，在2.4億慢性HBV感染者中，每年約有780,000人死亡。

目前，沒有針對急性乙型肝炎患者的特異性抗病毒治療藥物，大約95％的感染免疫功能正常的成年人會自發恢復，護理的主要目標是保持舒適、緩解癥狀并防止患者將感染傳染給他人。對于慢性HBV感染者，現在已經提供一些治療藥物和治療方案，如美國食品和藥物管理局已批準治療慢性乙型肝炎干擾素-α(標準和聚乙二醇化)和口服抗病毒藥物(恩替卡韋、替諾福韋、富馬酸二泊西、艾拉酚替諾福韋和非首選的拉米夫定、阿德福韋二吡呋酯和替比夫定)。目前對慢性乙型肝炎的治療可以減緩或預防肝硬化的進展，降低肝癌的發病率，提高長期生存率和生活質量，但不能治愈。因此，大多數開始乙肝治療的患者必須終生服藥，治療的副作用和所需的定期監測增加了患者管理的難度和復雜性。因此，乙型肝炎的防治主要依賴于早期診斷和接種疫苗。

HBV是一種DNA病毒，屬于嗜肝DNA病毒科，它于1965年由Blumberg博士發現的，Blumberg博士因此項重大發現而獲得了1976年諾貝爾醫學獎。HBV病毒，最初稱為Dane顆粒，是一種42納米病毒，HBV由核衣殼核心組成，被外脂蛋白外殼(也稱為包膜)包圍。該病毒包含3種主要結構抗原：表面抗原(Hepatitis?B?surface?antigen，HBsAg)、核心抗原(Hepatitis?B?core?antigen，HBcAg)和e抗原(Hepatitis?B?e?antigen，HBeAg)，其中HBsAg表達量大，在受感染個體的血液中以球形和管狀顆粒(約22nm)的形式存在，使得HBsAg成為乙肝檢測試劑和疫苗開發中的重要靶點。

由于乙型肝炎的臨床表現與其他病毒性肝炎無法明確區分，因此需要進行血清學檢測才能明確診斷，該檢測使用不同(組合)血清學標志物來識別HBV感染的不同階段，單克隆抗體是乙肝病毒檢測的重要手段，其能夠特異性的結合目標抗原，給出準確的診斷結果。但是隨著乙肝疫苗的使用和病毒的自然演進，HBV的突變株層出不窮，使用已知的單克隆抗體難以有效檢測患者或血液制品中的HBV含量或感染情況，給臨床診斷和血液制品的管理帶來了困難。

本發明中乙肝患者血液樣品中分離鑒定出新型乙肝病毒突變株，進而獲得了其HBsAg氨基酸序列，并以該HBsAg為目標抗原，免疫實驗動物，篩選并獲得單克隆抗體，該抗體能夠高特異性結合目標抗原，具有高靈敏性和特異性，為開發新型乙肝病毒檢測試劑提供了新的解決方案。

發明內容

為解決上述技術問題，本發明中提供了一種抗乙肝病毒表面抗原的單克隆抗體，包含輕鏈可變區和重鏈可變區，其輕鏈可變區包括氨基酸序列為SEQ?IDNO:1的LCDR1，氨基酸序列為SEQ?ID?NO:2的LCDR2，氨基酸序列為SEQ?ID?NO:3的LCDR3；重鏈鏈可變區包括氨基酸序列為SEQ?ID?NO:4的HCDR1，氨基酸序列為SEQ?ID?NO:5的HCDR2，氨基酸序列為SEQID?NO:6的HCDR3。

本發明所提供的單克隆抗體能夠高度特異性結合目標抗原，所述抗原來自新型乙肝病毒突變株，使得該單克隆抗體能夠有效檢測乙肝病毒突變株，為了研發相關檢測試劑，用于檢測血液制品的合格性，診斷相關病毒感染狀況提供了解決方案。