[發明專利]一種生產莫匹羅星的發酵培養基及莫匹羅星的生產方法

在審

• 申請號: 202211744274.2
• 申請日: 2022-11-01
• 公開（公告）號: CN115820763A
• 公開（公告）日: 2023-03-21
• 發明（設計）人: 徐浩;徐美冬;高立;陳志立;毛亮亮;楊小虎;孫鵬;楊志清
• 申請（專利權）人: 浙江海正藥業股份有限公司
• 主分類號: C12P17/16
• 分類號: C12P17/16;C12N1/20;C12R1/39
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種生產莫匹羅星的發酵培養基，其特征在于包括：葡萄糖80-120g/L、黃豆餅粉20-60g/L、棉籽餅粉10-30g/L、硫酸銨1-3g/L。

2.根據權利要求1所述的發酵培養基，其特征在于包括：葡萄糖100g/L、黃豆餅粉40g/L、棉籽餅粉20g/L、硫酸銨1g/L，所述發酵培養基的pH值為7.5±0.1。

3.一種莫匹羅星的生產方法，其特征在于包括以保藏編號為CGMCC No.25307的熒光假單胞菌(Pseudomonas fluorescens)HS-PF20-62為生產菌種，采用權利要求1-2任一項所述發酵培養基進行發酵培養。

4.根據權利要求3所述的生產方法，其特征在于，所述發酵培養的溫度為21℃-23℃。

5.根據權利要求3所述的生產方法，在所述發酵培養第48-96小時進行分批補料,其特征在于所述補料的物質為葡萄糖溶液；優選地，在所述發酵培養第48小時和第96小時分批補加葡萄糖溶液，每次補加葡萄糖溶液的體積為原發酵培養基體積的4％，所述葡萄糖溶液的質量百分比濃度為50％。

6.根據權利要求3-5任一項所述的生產方法，其特征在于包括：

步驟(1)菌種活化：將低溫保藏的保藏編號為CGMCC No.25307的熒光假單胞菌(Pseudomonas fluorescens)HS-PF20-62接種到平板培養基上，在26±1℃條件下培養24±4小時，得到涂布單菌落；

步驟(2)菌落培養：將步驟(1)得到的單菌落通過點種轉移到新的平板培養基上，每個平板上點種10-12顆單菌落；在26±1℃條件下培養3-6天，得到點種單菌落；

所述平板培養基組成如下：酵母抽提物5g/L、胰蛋白胨10g/L、氯化鈉10g/L，瓊脂15g/L，所述平板培養基的pH值為7.5±0.1；

步驟(3)搖瓶種子液制備：挑取1顆步驟(2)培養好的點種單菌落接種到種子培養基中，將種子搖瓶置于26±1℃，搖瓶轉速250±10r/min條件下培養28±4小時：

所述搖瓶種子培養基組成如下：葡萄糖20g/L、黃豆餅粉20g/L、酵母粉10g/L，碳酸鈣2g/L，所述種子培養基的pH值為7.5±0.1；

搖瓶種子培養基裝量：20ml/250ml；

步驟(4)搖瓶發酵培養：將步驟(3)制備的種子液按照體積比5％的移種量移入發酵搖瓶中，所述搖瓶發酵培養的發酵培養基體積裝量為20ml/250ml，搖瓶發酵培養溫度為22±1℃，發酵搖瓶轉速250±10r/min，發酵培養周期5-7天；

所述搖瓶發酵的發酵培養基為權利要求1-2任一項所述的發酵培養基。

7.根據權利要求6所述的生產方法,其中在步驟(4)搖瓶發酵培養中，在所述發酵培養第48-96小時進行分批補料，其特征在于所述補料的物質為葡萄糖溶液；優選地，在所述發酵培養第48小時和第96小時分批補加葡萄糖溶液，每次補加葡萄糖溶液的體積為原發酵培養基體積的4％，所述葡萄糖溶液的質量百分比濃度為50％。