[發明專利]含有丙氨酰谷氨酰胺的復方氨基酸藥物組合物中雜質的檢測方法

在審

• 申請號: 202211743456.8
• 申請日: 2022-12-30
• 公開（公告）號: CN115932113A
• 公開（公告）日: 2023-04-07
• 發明（設計）人: 黃嶺;胡金濤;付夢玲;張民;周程;吳俊
• 申請（專利權）人: 遠大生命科學（武漢）有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/32;G01N30/34;G01N30/60
• 代理公司: 北京泛華偉業知識產權代理有限公司 11280
• 代理人: 郭廣迅

1.一種含有丙氨酰谷氨酰胺的復方氨基酸藥物組合物中雜質的檢測方法，其采用高效液相色譜法，所述高效液相色譜法的條件包括：

采用以氨基丙基三乙氧基硅烷鍵合硅膠或氨基丙基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，以體積比為(25～45)：(75～55)的磷酸二氫鉀緩沖液-乙腈為流動相；

其中，所述磷酸二氫鉀緩沖液的濃度為0.001～0.03mol/L；

所述磷酸二氫鉀緩沖液用磷酸調節pH至2.5～5.5。

2.根據權利要求1所述的方法，其中，所述藥物組合物包含丙氨酰谷氨酰胺、甲硫氨酸和一種或多種選自鹽酸半胱氨酸、脯氨酸、絲氨酸、丙氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、門冬氨酸、酪氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、鹽酸精氨酸、鹽酸賴氨酸、纈氨酸、蘇氨酸、鹽酸組氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、胱氨酸、甘氨酸、醋酸賴氨酸、精氨酸、組氨酸、門冬酰胺、鹽酸鳥氨酸、乙酰酪氨酸或乙酰半胱氨酸的氨基酸；

優選地，所述藥物組合物包含丙氨酰谷氨酰胺、甲硫氨酸和一種或多種選自鹽酸精氨酸、鹽酸組氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、鹽酸賴氨酸、苯丙氨酸、蘇氨酸、纈氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、絲氨酸、鹽酸半胱氨酸、門冬氨酸或谷氨酸的氨基酸；

優選地，所述藥物組合物的雜質選自蛋氨酸亞砜、環-(L-丙氨酰-L-谷氨酰胺)、L-焦谷氨酰-L-丙氨酸、L-焦谷氨酸或L-丙氨酰-L-谷氨酸中的一種或多種；

更優選地，所述藥物組合物的雜質包括蛋氨酸亞砜、環-(L-丙氨酰-L-谷氨酰胺)、L-焦谷氨酰-L-丙氨酸、L-焦谷氨酸和L-丙氨酰-L-谷氨酸。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其中，所述以氨基丙基三乙氧基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱為Agilent?ZORBAX?Original?NH₂色譜柱，所述以氨基丙基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱為Waters?Spherisorb?Amino?NH₂色譜柱；

優選地，所述磷酸二氫鉀緩沖液-乙腈的體積比為(30～40)：(70～60)；

優選地，所述磷酸二氫鉀緩沖液的濃度為0.005～0.02mol/L；

優選地，所述磷酸二氫鉀緩沖液用磷酸調節pH至3.0～5.0；

優選地，所述流動相的洗脫方式為等度洗脫。

4.根據權利要求1至3中任一項所述的方法，其中，所述色譜柱的規格為(3.0～4.6)×(50～300)mm，優選為4.6×250mm；

優選地，所述色譜柱的填料粒徑為2.7～5.0μm，優選為5.0μm。

5.根據權利要求1至4中任一項所述的方法，其中，所述流動相的流速為0.5～1.5mL/min，優選為0.7mL/min。

6.根據權利要求1至5中任一項所述的方法，其中，所述色譜柱的柱溫為20～40℃，優選為30℃。

7.根據權利要求1至6中任一項所述的方法，其中，所述高效液相色譜法的條件還包括：進樣量為5～100μL，優選為20μL。

8.根據權利要求1至7中任一項所述的方法，其中，所述高效液相色譜法的條件還包括：檢測波長為200～220nm，優選為215nm。

9.根據權利要求1至8中任一項所述的檢測方法，其中，所述高效液相色譜法包括以下步驟：

(1)將環-(L-丙氨酰-L-谷氨酰胺)、L-焦谷氨酰-L-丙氨酸、L-焦谷氨酸和L-丙氨酰-L-谷氨酸和蛋氨酸亞砜定量溶于稀釋劑，獲得對照品溶液；

(2)將所述藥物組合物定量溶于稀釋劑，獲得供試品溶液；

(3)分別取所述供試品溶液和對照品溶液，按照所述高效液相色譜法的條件進行檢測。

10.根據權利要求9所述的檢測方法，其中，所述稀釋劑為流動相；

優選地，所述供試品溶液中丙氨酰谷氨酰胺的濃度為2～5mg/mL；

優選地，所述供試品溶液中除丙氨酰谷氨酰胺外的氨基酸的濃度為2.5～4.5mg/mL；

優選地，所述對照品溶液中環-(L-丙氨酰-L-谷氨酰胺)、L-焦谷氨酰-L-丙氨酸、L-焦谷氨酸和L-丙氨酰-L-谷氨酸和蛋氨酸亞砜的濃度分別為0.0002～0.4mg/mL、0.0015～0.052mg/mL、0.0015～0.02mg/mL、0.003～0.08mg/mL和0.002～0.02mg/mL。