[發明專利]一種用于優化遺傳毒理染色體畸變試驗的細胞處理方法

在審

• 申請號: 202211722970.3
• 申請日: 2022-12-30
• 公開（公告）號: CN116399673A
• 公開（公告）日: 2023-07-07
• 發明（設計）人: 單翔;樂聰;徐寧;康明珠;陳瑤瑤;高立文
• 申請（專利權）人: 蘇州藥明康德新藥開發有限公司
• 主分類號: G01N1/30
• 分類號: G01N1/30;G01N1/28
• 代理公司: 上海市匯業律師事務所 31325
• 代理人: 王函

本發明涉及細胞生物學技術領域，特別是涉及一種用于優化遺傳毒理染色體畸變試驗的細胞處理方法，包括：將低滲液加入重懸細胞中，進行一次孵育；向一次孵育后的細胞中加入固定液，進行二次孵育；將二次孵育后的細胞制片，將細胞玻片浸入1～20％的染色液中1～20min，即可。本發明的細胞處理方法優化了低滲條件，提高低滲效率；優化染色效果，提高玻片質量進一步提升閱片效率。經此細胞處理方法染色的玻片，染色均勻，深淺適宜，既能很好的評估畸變率，也能更快的閱片。

技術領域

本發明涉及細胞生物學技術領域，特別是涉及一種用于優化遺傳毒理染色體畸變試驗的細胞處理方法。

背景技術

嚙齒類動物骨髓細胞染色體畸變試驗，出現較早，在上個世紀70-80年代，廣泛用于評估化合物的系統遺傳毒性。但因其操作復雜，程序繁瑣，閱片時間長等問題，逐漸被紅細胞微核試驗所取代。但當化合物可引起如體溫變化、應激、誘導紅細胞生成改變等情況下，化合物可誘導機體產生非遺傳毒性機制造成的微核升高。此時，可用該染色體畸變試驗作為體內遺傳毒理試驗評估化合物的遺傳毒性。

骨髓細胞染色體畸變試驗作為經典的遺傳毒理試驗，根據一些文獻報道，其染色效果和中期相染色體的呈現形態并不好，嚴重影響畸變率的評估，同時大大的影響了閱片的進度。急需一種方法來優化細胞的處理和制備的過程。

發明內容

鑒于以上所述現有技術的缺點，本發明的目的在于提供一種用于優化遺傳毒理染色體畸變試驗的細胞處理方法，用于解決現有技術中遺傳毒理試驗中染色體畸變情況不易觀察的問題。本發明的細胞處理方法優化了低滲條件，提高低滲效率；優化染色效果，提高玻片質量進一步提升閱片效率。經此細胞處理方法染色的玻片，染色均勻，深淺適宜，既能很好的評估畸變率，也能更快的閱片。

為實現上述目的及其他相關目的，

本發明的第一方面，提供一種用于優化遺傳毒理染色體畸變試驗的細胞處理方法，包括如下步驟：

步驟一、將低滲液加入重懸細胞中，進行一次孵育；

步驟二、向一次孵育后的細胞中加入固定液，進行二次孵育；

步驟三、將二次孵育后的細胞制片，將細胞玻片浸入1～20％的染色液中1～20min，即可。

經低滲液一次孵育、固定液二次孵育處理后的細胞，可保證有足夠數目的細胞充分吸漲，以保證有足夠多的中期相細胞可用于閱片和評估。在染色過程中，優化染色液的濃度，經此方法染色的玻片，染色均勻，深淺適宜。

于本發明的一實施例中，包括如下步驟：

步驟一、將低滲液加入重懸細胞中進行一次孵育，一次孵育時至少進行一次混懸操作；

步驟二、向一次孵育后的細胞中加入固定液，離心得到重懸細胞；再加入固定液，進行二次孵育；

步驟三、將二次孵育后的細胞制片，將細胞玻片浸入1～20％的染色液中1～20min，染色完成后采用純水浸泡1～3次，即可。

在一次孵育過程中，在低滲過程中增加了混懸操作(手動旋轉、搖晃混勻的操作)，使得管內細胞能充分與低滲液接觸，提高低滲效率。

在染色過程中，優化染色液的濃度，經此方法染色的玻片，染色均勻，深淺適宜。在細胞染色完成后，通過純水多次洗滌，更便于后期觀察。

于本發明的一實施例中，所述步驟一中重懸細胞的制備過程為：將細胞吹打分散，細胞篩過濾，離心，即得。

一般而言，細胞篩的粒徑不能小于40微米。

細胞吹打分散后，增加使用細胞篩以過濾雜質、碎片及細胞團塊。