[發明專利]抗小鼠BP180NC14A的兔雜交瘤單克隆抗體及制備方法、應用和雜交瘤細胞株

在審

• 申請號: 202211714352.4
• 申請日: 2022-12-29
• 公開（公告）號: CN115850469A
• 公開（公告）日: 2023-03-28
• 發明（設計）人: 劉亞樂;夏育民;王思佳;彭雪婷;曾維惠;李亮;王繪霞;胡光蕾
• 申請（專利權）人: 西安交通大學醫學院第二附屬醫院
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C12N5/20;G01N33/68;G01N33/577
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 范巍

本發明公開了抗小鼠BP180NC14A的兔雜交瘤單克隆抗體及制備方法、應用和雜交瘤細胞株。所述單克隆抗體對從Q07563?1中的第499?573位核苷酸編碼的多肽(即SEQ ID No.1所示氨基酸序列)具有特異性。本發明的有益效果體現在提供了一種抗小鼠BP180NC14A的單克隆抗體及其制備和應用，以及產生該單克隆抗體的兔雜交瘤細胞株，為進一步明確BP180在皮膚組織中的病理生理學研究提供了基礎，并可用于小鼠大皰性類天皰瘡(Bullous Pemphigoid,BP)模型的誘導或小鼠體內抗BP180IgG滴度的檢測，具有重要應用前景。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及抗小鼠BP180NC14A的兔雜交瘤單克隆抗體及制備方法、應用和雜交瘤細胞株。

背景技術

大皰性類天皰瘡(Bullous Pemphigoid,BP)是最常見的自身免疫性大皰性皮膚病，主要表現為累及身體屈側的張力性水皰或血皰，伴不同程度的瘙癢。BP患者的主要特征為表皮下水皰形成和體內存在作用于半橋粒成分的自身抗體。BP好發于老年人，尤其是70歲以上老人，隨年齡的增長，其發病率亦逐漸升高，80歲以上患者的發病率高達150-330/百萬。BP在世界各地的年發病率波動在2.5-66/百萬，但整體呈上升趨勢。BP患者并發其他疾病的風險明顯增加，除最常見的神經系統疾病外，還可并發腫瘤、糖尿病或其他免疫性皮膚病，因此，BP患者死亡率亦呈上升趨勢。BP已成為增加老年患者疾病負擔的重要原因之一。然而，由于缺乏成熟的BP模型，研究者對BP的發病機制了解不足，導致BP缺乏疾病特異性的治療方法，使得糖皮質激素仍為BP治療的主流藥物。因此，建立成熟的BP動物模型，深入探討BP的發病機制，已經成為BP新療法開發的當務之急。

目前，研究者普遍認可的BP發病機制為自身抗體學說。BP患者體內存在針對真皮-表皮連接部位半橋粒成分BP180和BP230的自身抗體，這些致病性自身抗體與抗原結合后引發一系列的炎癥免疫反應，導致真皮-表皮分離和水皰形成。大量研究發現BP180是BP致病性自身抗體識別的主要靶抗原，這些抗體與BP180結合后激活下游信號，趨化肥大細胞、嗜酸性粒細胞和中性粒細胞等炎癥細胞至皮損部位，釋放炎性介質，破壞真皮-表皮的連接狀態，最終導致表皮下水皰形成。在此過程中，病理性自身抗體與BP180分子結合是至關重要的環節，且抗BP230抗體的產生往往繼發于抗BP180抗體之后。因此，靶向BP180分子是誘導BP動物模型的關鍵。

BP動物模型是在體全面觀察BP發病機制的手段。然而目前的BP模型主要采用新生乳鼠，皮下注射純化的人抗BP180-NC16A抗體誘導。該模型小鼠的鼠齡小，與臨床中BP主要發生于老年人這一現象不相符；該模型的維持時間短，不利于長期觀察干預效應；此外，人抗BP180-NC16A抗體取自人體，需要大量BP患者的血清進行提純，標本的獲得較為困難。

因此，當前缺乏能夠全面觀察BP發病機制的有效手段，研究一種新的靶向BP180抗原的手段以制備成熟方便的BP動物模型勢在必行。

發明內容

為了克服上述現有技術的缺點，本發明的目的在于提供一種抗小鼠BP180NC14A的兔雜交瘤單克隆抗體及制備方法、應用和雜交瘤細胞株。

為了達到上述目的，本發明采用以下技術方案予以實現：

本發明公開了一種抗小鼠BP180 NC14A的兔雜交瘤單克隆抗體，該單克隆抗體對從Q07563-1中的第499-573位核苷酸編碼的多肽具有特異性，所述多肽的氨基酸序列如SEQID No.1所示。

優選地，該單克隆抗體特異性的靶向小鼠BP180的NC14A真皮-表皮的連接區域，實現誘導真表皮分離和表皮下水皰形成BP的病理特點。

優選地，該單克隆抗體由雜交瘤細胞株分泌產生，所述雜交瘤細胞株于2022年4月26日，保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCCNO:C202296。