[發(fā)明專利]抗小鼠BP180NC14A的兔雜交瘤單克隆抗體及制備方法、應用和雜交瘤細胞株

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202211714352.4
• 申請日: 2022-12-29
• 公開（公告）號: CN115850469A
• 公開（公告）日: 2023-03-28
• 發(fā)明（設計）人: 劉亞樂;夏育民;王思佳;彭雪婷;曾維惠;李亮;王繪霞;胡光蕾
• 申請（專利權）人: 西安交通大學醫(yī)學院第二附屬醫(yī)院
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C12N5/20;G01N33/68;G01N33/577
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 范巍

1.一種抗小鼠BP180 NC14A的兔雜交瘤單克隆抗體，其特征在于，該單克隆抗體對從Q07563-1中的第499-573位核苷酸編碼的多肽具有特異性，所述多肽的氨基酸序列如SEQID No.1所示。

2.如權利要求1所述的抗小鼠BP180 NC14A的兔雜交瘤單克隆抗體，其特征在于，該單克隆抗體特異性的靶向小鼠BP180的NC14A真皮-表皮的連接區(qū)域，實現(xiàn)誘導真表皮分離和表皮下水皰形成BP的病理特點。

3.如權利要求1所述的抗小鼠BP180 NC14A的兔雜交瘤單克隆抗體，其特征在于，該單克隆抗體由雜交瘤細胞株分泌產(chǎn)生，所述雜交瘤細胞株于2022年4月26日，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO:C202296。

4.權利要求1～3中任意一項所述的抗小鼠BP180 NC14A的兔雜交瘤單克隆抗體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)制備抗原

采用SEQ ID No.1所示的核苷酸序列編碼對應的多肽，與載體融合后形成過表達載體，將該過表達載體轉染至人HEK293細胞中，促使其產(chǎn)生BP180NC14A蛋白；

2)免疫動物

將分離得到的BP180 NC14A蛋白免疫日本大耳兔，獲得免疫日本大耳兔；

3)建立雜交瘤細胞系

取免疫日本大耳兔的脾臟提取能夠產(chǎn)生抗體的漿細胞，與同系動物的骨髓瘤細胞融合制備雜交瘤細胞，融合后細胞經(jīng)HAT培養(yǎng)基選擇性培養(yǎng)，采用ELISA篩選陽性克隆，用有限稀釋法對陽性孔的雜交瘤細胞進行克隆化培養(yǎng)直至克隆化細胞抗體陽性率100％，將雜交瘤細胞經(jīng)體外連續(xù)傳代3個月以上和反復凍存、復蘇處理，直到細胞系能穩(wěn)定分泌單克隆抗體，得到雜交瘤細胞系；

4)將步驟3)建系的雜交瘤細胞進行體外培養(yǎng)，收集上清，用親和層析法獲得純化的單克隆抗體。

5.根據(jù)權利要求4所述的抗小鼠BP180 NC14A的兔雜交瘤單克隆抗體的制備方法，其特征在于，步驟1)中，所述載體采用pTT5載體。

6.根據(jù)權利要求4所述的抗小鼠BP180 NC14A的兔雜交瘤單克隆抗體的制備方法，其特征在于，步驟2)中，免疫日本大耳兔具體操作如下：每只大白兔以100ug的量進行腹腔注射，每兩周一次，共三次，第四次沖擊免疫一次，3天后待融合，獲得免疫大白兔。

7.權利要求1～3中任意一項所述的抗小鼠BP180 NC14A的兔雜交瘤單克隆抗體在制備大皰性類天皰瘡模型中的應用。

8.權利要求1～3中任意一項所述的抗小鼠BP180 NC14A的兔雜交瘤單克隆抗體在制備檢測大皰性類天皰瘡小鼠模型中體內(nèi)抗BP180抗體濃度的試劑盒中的應用。

9.一種產(chǎn)生權利要求1～3中任意一項所述的抗小鼠BP180 NC14A的兔雜交瘤單克隆抗體的雜交瘤細胞株，其特征在于，該雜交瘤細胞株于2022年4月26日，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO:C202296。