[發(fā)明專利]一種生產(chǎn)白喉毒素?zé)o毒突變蛋白的方法及其使用的特異DNA分子

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202211704161.X
• 申請日: 2022-12-29
• 公開（公告）號(hào): CN115850524A
• 公開（公告）日: 2023-03-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王希良;高克學(xué);邵軍超;李世崇;司炳銀;王莉;王立博
• 申請（專利權(quán)）人: 北京吉諾衛(wèi)生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C07K19/00
• 分類號(hào): C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;C12N1/21;C12P21/02;C07K1/18;C07K1/34;C07K1/36;C12R1/19
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 閆書寧

1.一種多肽，包括信號(hào)肽和白喉毒素?zé)o毒突變蛋白；

所述信號(hào)肽為如下A1)-A5)中任一種：

A1)氨基酸序列是SEQ ID No：4的信號(hào)肽FIGI；

A2)氨基酸序列是SEQ ID No：6的信號(hào)肽SipA；

A3)氨基酸序列是SEQ ID No：8的信號(hào)肽YTFQ；

A4)氨基酸序列是SEQ ID No：10的信號(hào)肽OMPF；

A5)將A1)-A4)所述多肽經(jīng)過氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加得到的與A1)-A4)的多肽具有80％以上的同一性且具有相同功能的多肽；

所述白喉毒素?zé)o毒突變蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.一種DNA分子；所述DNA分子的核苷酸序列包括如SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3所示的DNA分子。

3.一種DNA分子，其特征在于：所述DNA分子編碼權(quán)利要求1所述的多肽。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述DNA分子，其特征在于，所述的DNA分子由編碼信號(hào)肽的核苷酸序列和編碼白喉毒素?zé)o毒突變蛋白的核苷酸序列組成；

優(yōu)選的，所述編碼白喉毒素?zé)o毒突變蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO:2或3所示；

優(yōu)選的，所述編碼信號(hào)肽的核苷酸序列可為C1)、C2)、C3)、C4)或C5)：

C1)核苷酸序列如SEQ ID No：5所示的DNA分子；

C2)核苷酸序列如SEQ ID No：7所示的DNA分子；

C3)核苷酸序列如SEQ ID No：9所示的DNA分子；

C4)核苷酸序列如SEQ ID No：11所示的DNA分子；

C5)與C1)-C4)所述信號(hào)肽的核苷酸序列具有90％或90％以上同一性的DNA分子。

5.含有權(quán)利要求2至4任一所述DNA分子的重組質(zhì)粒、重組菌或載體。

6.權(quán)利要求2至4任一所述DNA分子或含有權(quán)利要求2至4任一所述DNA分子的重組質(zhì)粒、重組菌或載體在表達(dá)或生產(chǎn)白喉毒素?zé)o毒突變蛋白中的應(yīng)用；

所述白喉毒素?zé)o毒突變蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

7.一種表達(dá)或生產(chǎn)CRM197蛋白的方法，包括如下步驟(1)：發(fā)酵培養(yǎng)宿主細(xì)胞；所述宿主細(xì)胞包含編碼信號(hào)肽的核苷酸序列和編碼權(quán)利要求1所述白喉毒素?zé)o毒突變蛋白的核苷酸序列；

所述信號(hào)肽為如下A1)-A5)中任一種：

A1)氨基酸序列是SEQ ID No：4的信號(hào)肽FIGI；

A2)氨基酸序列是SEQ ID No：6的信號(hào)肽SipA；

A3)氨基酸序列是SEQ ID No：8的信號(hào)肽YTFQ；

A4)氨基酸序列是SEQ ID No：10的信號(hào)肽OMPF；

A5)將A1)-A4)所述信號(hào)肽經(jīng)過氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加得到的與A1)-A4)的多肽具有80％以上的同一性且具有相同功能的信號(hào)肽；

優(yōu)選的，所述方法還包括步驟(2)：培養(yǎng)所述宿主細(xì)胞，使得宿主菌的周質(zhì)空間表達(dá)CRM197蛋白；

優(yōu)選的，所述宿主為細(xì)菌、酵母、昆蟲細(xì)胞或哺乳細(xì)胞。