[發(fā)明專利]與大豆百粒重相關(guān)的CAPS標(biāo)記及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202211700556.2
• 申請(qǐng)日: 2022-12-28
• 公開（公告）號(hào): CN115976265A
• 公開（公告）日: 2023-04-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 邱麗娟;李英慧;張皓
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物科學(xué)研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11;A01H1/04
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 黃爽

本發(fā)明提供一種與大豆百粒重相關(guān)的CAPS標(biāo)記及其應(yīng)用。本發(fā)明與大豆百粒重相關(guān)的CAPS標(biāo)記含有大豆Glyma.19G194500基因如SEQ?ID?NO:1所示序列第673bp處的多態(tài)性為A或C的核苷酸序列。根據(jù)該標(biāo)記，建立了鑒定和選育大豆百粒重品種的方法，通過檢測(cè)Glyma.19G194500基因的基因型可選擇出攜帶該基因大粒等位變異的材料，可避免耗時(shí)耗力的表型鑒定，通過基因型對(duì)育種材料進(jìn)行篩選，極大提高了育種過程中大粒品種的選擇效率、縮短育種時(shí)間，對(duì)于大粒品種的培育效果顯著。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子標(biāo)記和植物遺傳育種技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，涉及一種與大豆百粒重相關(guān)的CAPS標(biāo)記及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

大豆(Glycine?max(L.)Merr.)是世界上重要的糧飼兼用作物。近年來我國(guó)大豆消費(fèi)量快速增長(zhǎng)，在耕地面積有限的條件下，如何有效提升單產(chǎn)是大豆育種中亟待解決的重大課題。畝株數(shù)、株莢數(shù)、莢粒數(shù)和百粒重是產(chǎn)量的主要構(gòu)成因子。縱觀大豆的選育歷程，從野生到地方再到改良品種，籽粒不斷加大，產(chǎn)量不斷提升，表明百粒重與產(chǎn)量密切相關(guān)。

百粒重是典型的多基因調(diào)控的數(shù)量性狀，利用傳統(tǒng)育種方法培育大粒高產(chǎn)品種不但需要花費(fèi)很長(zhǎng)的時(shí)間，而且難于成功，不能夠滿足當(dāng)前育種的發(fā)展，急需一種更為準(zhǔn)確、高效的鑒定大豆粒重的方法。隨著分子標(biāo)記的開發(fā)和使用，分子標(biāo)記輔助選擇(Molecularmarker-assisted?selection，MAS)成為可以節(jié)約人力、物力和加速育種進(jìn)程的有效方法。MAS的最大優(yōu)點(diǎn)是在不需要評(píng)估表型特征的情況下，通過確認(rèn)是否帶有目標(biāo)基因而鑒定出大粒高產(chǎn)品種，能增加育種工作的效率和速度。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種與大豆百粒重相關(guān)的CAPS標(biāo)記及其應(yīng)用。

為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，第一方面，本發(fā)明提供一種與大豆百粒重相關(guān)的CAPS標(biāo)記，所述標(biāo)記含有大豆Glyma.19G194500基因如SEQ?ID?NO:1所示序列第673bp處的多態(tài)性為A或C的核苷酸序列。

進(jìn)一步地，標(biāo)記所含多態(tài)性位點(diǎn)的基因型為AA，對(duì)應(yīng)的大豆百粒重較小(5.57-33.84g)，若基因型為CC，對(duì)應(yīng)的大豆百粒重較大(12.50-45.77g)。

第二方面，本發(fā)明提供用于擴(kuò)增所述標(biāo)記的引物，包括如SEQ?ID?NO:2所示的上游引物和如SEQ?ID?NO:3所示的下游引物。

第三方面，本發(fā)明提供含有所述引物的檢測(cè)試劑或試劑盒。

第四方面，本發(fā)明提供所述標(biāo)記、所述引物或含有所述引物所述檢測(cè)試劑或試劑盒的以下任一應(yīng)用：

(1)用于大豆百粒重性狀選育；

(2)用于大豆百粒重性狀的早期預(yù)測(cè)；

(3)用于大豆Glyma.19G194500基因分型。

第五方面，本發(fā)明提供檢測(cè)大豆百粒重的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)提取待測(cè)大豆總DNA；

2)以DNA為模板，利用SEQ?ID?NO:2-3所示引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增；

3)分析PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。

優(yōu)選地，步驟2)使用的PCR反應(yīng)體系為：60ng基因組DNA、10×PCR緩沖液2μL，2mMdNTPs?1.5μL，2mM上、下游引物各1μL，1U?Taq?DNA聚合酶0.2μL，ddH₂O補(bǔ)足體積到20μL。

優(yōu)選地，PCR擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性4min；94℃變性30s，57℃退火30s，72℃延伸30s，36個(gè)循環(huán)；最后72℃延伸10min。