[發明專利]與大豆百粒重相關的CAPS標記及其應用

在審

• 申請號: 202211700556.2
• 申請日: 2022-12-28
• 公開（公告）號: CN115976265A
• 公開（公告）日: 2023-04-18
• 發明（設計）人: 邱麗娟;李英慧;張皓
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院作物科學研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11;A01H1/04
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 黃爽

1.與大豆百粒重相關的CAPS標記，其特征在于，所述標記含有大豆Glyma.19G194500基因如SEQ?ID?NO:1所示序列第673bp處的多態性為A或C的核苷酸序列。

2.根據權利要求1所述的標記，其特征在于，標記所含多態性位點的基因型為AA，對應的大豆百粒重較小，若基因型為CC，對應的大豆百粒重較大。

3.用于擴增權利要求1或2所述標記的引物，其特征在于，包括如SEQ?ID?NO:2所示的上游引物和如SEQ?ID?NO:3所示的下游引物。

4.含有權利要求3所述引物的檢測試劑或試劑盒。

5.權利要求1或2所述標記、權利要求3所述引物或權利要求4所述檢測試劑或試劑盒的以下任一應用：

(1)用于大豆百粒重性狀選育；

(2)用于大豆百粒重性狀的早期預測；

(3)用于大豆Glyma.19G194500基因分型。

6.檢測大豆百粒重的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)提取待測大豆總DNA；

2)以DNA為模板，利用SEQ?ID?NO:2-3所示引物進行PCR擴增；

3)分析PCR擴增產物。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，步驟2)使用的PCR反應體系為：60ng基因組DNA、10×PCR緩沖液2μL，2mM?dNTPs?1.5μL，2mM上、下游引物各1μL，1U?Taq?DNA聚合酶0.2μL，ddH₂O補足體積到20μL。

8.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，步驟2)使用的PCR擴增程序為：94℃預變性4min；94℃變性30s，57℃退火30s，72℃延伸30s，36個循環；最后72℃延伸10min。

9.根據權利要求6-7任一項所述的方法，其特征在于，步驟3)包括：利用DraIII-HF內切酶對PCR擴增產物進行酶切，若酶切產物為785bp目的條帶，則待測大豆攜帶AA等位基因，對應的大豆百粒重較小；若酶切產物為676bp和109bp的兩個目的條帶，則待測大豆攜帶CC等位基因，對應的大豆百粒重較大。

10.根據權利要求9所述的方法，其特征在于，酶切體系為：PCR擴增產物5μl、0.4UDraIII-HF內切酶、1.5μL?NEB緩沖液，ddH₂O補足體積到10μL；

酶切條件：37℃酶切40min。