[發(fā)明專利]一組穿心蓮內(nèi)酯合成相關(guān)P450細(xì)胞色素酶及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202211669385.1
• 申請(qǐng)日: 2022-12-24
• 公開（公告）號(hào): CN115851637A
• 公開（公告）日: 2023-03-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周景文;李珊;高松;徐沙;曾偉主;余世琴
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N9/02
• 分類號(hào): C12N9/02;C12N15/53;C12N15/70;C12N15/81;C12N1/19;C12P7/42;C12R1/865
• 代理公司: 哈爾濱市陽(yáng)光惠遠(yuǎn)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211
• 代理人: 林娟

1.穿心蓮來(lái)源的CYP450酶在催化合成3,15,19-Trihydroxy-8(17),13-ent-labdadiene-16-oic acid中的應(yīng)用；所述穿心蓮來(lái)源的CYP450酶為CYP71A8和CYP71D10。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述CYP71A8的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述CYP71D10的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述CYP71A8的N端截短32位氨基酸，所述CYP71D10的N端截短28位氨基酸。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，N端截短32位氨基酸的CYP71A8的氨基酸序列如SEQ ID NO.3，N端截短28位氨基酸的CYP71D10的氨基酸序列如SEQ ID NO.4中所示。

5.一種重組釀酒酵母，其特征在于，所述重組釀酒酵母敲除基因組上的ROX1、GAL80基因；整合表達(dá)GGPP合酶編碼基因、CPS二萜合酶編碼基因；游離表達(dá)N端截短32位氨基酸的CYP71A8編碼基因CYP71A8t、N端截短28位氨基酸的CYP71D10編碼基因CYP71D10t和CPR編碼基因ApCPR。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的重組釀酒酵母，其特征在于，敲除ROX1位點(diǎn)后，在ROX1位點(diǎn)整合GGPP合酶編碼基因和CPS二萜合酶編碼基因。

7.一種全細(xì)胞催化劑，其特征在于，所述全細(xì)胞催化劑包含權(quán)利要求5或6所述的重組釀酒酵母。

8.一種合成3,15,19-Trihydroxy-8(17),13-ent-labdadiene-16-oic acid的方法，所述方法為以權(quán)利要求5或6所述的重組釀酒酵母或權(quán)利要求7所述的全細(xì)胞催化劑為發(fā)酵菌株，發(fā)酵生產(chǎn)3,15,19-Trihydroxy-8(17),13-ent-labdadiene-16-oic acid。

9.穿心蓮來(lái)源的CYP450酶、或權(quán)利要求5或6所述重組釀酒酵母、或權(quán)利要求7所述全細(xì)胞催化劑、或權(quán)利要求8所述方法在催化合成穿心蓮內(nèi)酯或含有穿心蓮內(nèi)酯的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

10.權(quán)利要求5或6所述重組釀酒酵母、或權(quán)利要求7所述全細(xì)胞催化劑、或權(quán)利要求8所述方法在催化合成3,15,19-Trihydroxy-8(17),13-ent-labdadiene-16-oic acid或含有3,15,19-Trihydroxy-8(17),13-ent-labdadiene-16-oic acid的產(chǎn)品中的應(yīng)用。