[發明專利]一種親和試劑及其分離方法、檢測蛋白質中水楊酰化賴氨酸的方法

在審

• 申請號: 202211649216.1
• 申請日: 2022-12-21
• 公開（公告）號: CN116284347A
• 公開（公告）日: 2023-06-23
• 發明（設計）人: 戴倫治;龔艷秋
• 申請（專利權）人: 四川大學華西醫院
• 主分類號: C07K16/06
• 分類號: C07K16/06;G01N33/68
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 覃蛟

本發明公開了一種親和試劑及其分離方法、檢測蛋白質中水楊酰化賴氨酸的方法，涉及蛋白質翻譯后修飾檢測試劑與檢測方法技術領域。發明人發現一種新型的蛋白質翻譯后修飾：賴氨酸水楊酰化。其可作為一種新的表觀遺傳并且證明關鍵代謝酶的水楊酰化可抑制代謝酶活性從而抑制糖酵解。本發明不僅進一步證實了賴氨酸水楊酰化(Ksa)修飾與蛋白酶活性相關，Ksa修飾可影響糖酵解和細胞增殖，還為研究水楊酰化的功能及其在各種病理生理狀況中發揮的作用掀開了新的篇章。

技術領域

本發明涉及蛋白質翻譯后修飾檢測試劑與檢測方法技術領域，具體而言，涉及一種親和試劑及其分離方法、檢測蛋白質中水楊酰化賴氨酸的方法。

背景技術

阿司匹林是目前世界上最常用的藥物之一，主要用于治療疼痛、發熱和炎癥，也能降低非致死性心肌梗死和心血管疾病的發病率。另外，阿司匹林擁有預防癌癥的能力，有遺傳傾向的結直腸癌高危人群服用阿司匹林，患癌風險將減半，且預防作用可維持10-20年。對已確診的結直腸癌患者，服用阿司匹林也可降低結直腸癌的死亡率。

研究表明，阿司匹林主要通過兩種機制發揮治療作用。第一種機制是阿司匹林進入體內成為乙酰基供體，促進重要功能蛋白的乙酰化過程。例如，阿司匹林能增強環氧合酶1(COX1)和環氧合酶2(COX2)活性位點的絲氨酸530位和516位的乙酰化，抑制COX1和COX2活性，阻礙花生四烯酸轉化為血栓素A2或前列腺素E2，發揮抗炎作用。阿司匹林還可以乙酰化一氧化氮復合酶的賴氨酸，調節內皮細胞的一氧化氮生成。第二種機制是阿司匹林作為小分子抑制劑，抑制靶蛋白活性。例如，蛋白磷酸酶2A(PP2A)是機體內重要的磷酸酶之一，介導底物蛋白(如β-catenin，Wnt信號轉導的關鍵蛋白)的去磷酸化過程。阿司匹林能結合并抑制PP2A活性，促進β-catenin特定氨基酸殘基(T41和S45)的磷酸化，激活β-catenin的泛素化降解，下調β-catenin蛋白水平，抑制腫瘤細胞的Wnt信號通路，從而達到預防結直腸癌的目的。然而，上述兩種機制尚無法完全解釋阿司匹林的治療作用，阿司匹林是否還存在其它分子機制執行生物學功能？

目前已發現了超過400種蛋白質翻譯后修飾，包括乙酰化、泛素化、磷酸化、糖基化、甲基化等。各種修飾會改變蛋白質的電荷狀態、疏水性、蛋白質構象等性質，最終動態調控蛋白質功能。賴氨酸苯甲酰化修飾是第一種被發現的芳香環修飾，具有修飾體積大、疏水性強等特征，主要調節甘油磷酸代謝、卵巢類固醇生成等過程。考慮到阿司匹林的分子結構以及在體內的代謝特點與苯甲酰化類似，那么阿司匹林是否可以通過賴氨酸水楊酰化(Ksa)來影響蛋白功能？

因而，目前需要開發與阿司匹林治療的各種疾病和癥狀相關的蛋白質賴氨酸水楊酰化修飾的試劑和方法。

鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的目的在于提供一種親和試劑及其分離方法、檢測蛋白質中水楊酰化賴氨酸的方法以解決上述技術問題。

本發明是這樣實現的：

本文中使用的術語“肽”是指通過肽鍵連接的兩個或多個氨基酸的線性鏈。多肽可包括約2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、40、50、100、200或更多的氨基酸。肽的氨基酸可以被修飾、刪除、添加或者取代。肽可以通過本領域已知的常規技術手段獲得，例如通過酶消化從天然或充足蛋白質中合成或獲得。

本文中使用的術語“多肽”指至少四個氨基酸、最好是在約在20個氨基酸左右的多肽，而不考慮翻譯后修飾。本文中使用的術語“蛋白質”是由一種貨多種多肽組成的生物分子，而不考慮翻譯后修飾。蛋白質中的每一種多肽都可以是一個亞單元。多肽或者蛋白質可以是天然的或修飾的形式，并且可以表現出生物功能和特征。