[發明專利]7α-羥基類固醇脫氫酶突變體及其在7-氧代-石膽酸合成中的應用

在審

• 申請號: 202211637423.5
• 申請日: 2022-12-16
• 公開（公告）號: CN116200352A
• 公開（公告）日: 2023-06-02
• 發明（設計）人: 張榮珍;柳志永
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N9/04
• 分類號: C12N9/04;C12N15/53;C12N15/70;C12N1/21;C12P33/02;C12R1/19
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 趙巧娜

1.一種7α-羥基類固醇脫氫酶突變體，其特征在于，所述7α-羥基類固醇脫氫酶突變體為將氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示的7α-羥基類固醇脫氫酶的氨基酸序列的第262位賴氨酸突變為蘇氨酸得到的；

或，所述7α-羥基類固醇脫氫酶突變體為將氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示的7α-羥基類固醇脫氫酶的氨基酸序列的第301位谷氨酰胺突變為異亮氨酸得到的；

或，所述7α-羥基類固醇脫氫酶突變體為將氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示的7α-羥基類固醇脫氫酶的氨基酸序列的第258位異亮氨酸突變為甲硫氨酸，同時將氨基酸序列如SEQIDNO.2所示的7α-羥基類固醇脫氫酶的氨基酸序列的第262位賴氨酸突變為蘇氨酸得到的。

2.編碼權利要求1所述突變體的基因。

3.攜帶權利要求2所述基因的重組載體。

4.根據權利要求3所述的重組載體，其特征在于，所述重組載體是以pET-21a、pET-21a或pRSFDuet-1為表達載體。

5.表達權利要求1所述的突變體、或攜帶權利要求2所述的基因、或攜帶權利要求3或4所述的重組載體的重組細胞。

6.根據權利要求5所述的重組細胞，其特征在于，所述重組細胞以細菌或真菌為表達宿主。

7.一種用于催化鵝去氧膽酸合成7-氧代-石膽酸的催化劑，其特征在于，所述催化劑為權利要求1所述的7α-羥基類固醇脫氫酶突變體，或采用權利要求5或6所述重組細胞制備得到的含有7α-羥基類固醇脫氫酶突變體的酶液或其凍干粉。

8.一種合成7-氧代-石膽酸的方法，其特征在于，所述方法為，將權利要求1所述的突變體，或采用權利要求5或6所述重組細胞制備得到的突變體添加至含有底物鵝去氧膽酸、輔酶NAD⁺的反應體系中，催化制備得到7-氧代-石膽酸。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述反應體系中還含有pH?8.0～9.5的緩沖鹽溶液；所述底物鵝去氧膽酸的濃度為2～50mM，反應溫度為20～40℃。

10.權利要求1所述的突變體、或權利要求2所述的基因、或權利要求3或4所述的重組載體、或權利要求5或6所述的重組細胞在制備7-氧代-石膽酸或含有7-氧代-石膽酸的產品中的應用。