[發(fā)明專利]一種去除超低分子量透明質(zhì)酸鈉中內(nèi)毒素的方法

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• 申請日: 2022-12-18
• 公開（公告）號: CN115785301A
• 公開（公告）日: 2023-03-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐勇剛;謝玉巧
• 申請（專利權(quán)）人: 南京樂韜生物科技有限公司
• 主分類號: C08B37/08
• 分類號: C08B37/08
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明公開了一種去除超低分子量透明質(zhì)酸鈉中內(nèi)毒素的方法，屬于生物化工技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明公開了一種去除超低分子量透明質(zhì)酸鈉中內(nèi)毒素的方法，包括以下步驟：(1)直接用水室溫溶解平均分子量低于10KDa的超低分子量透明質(zhì)酸鈉，配制得到澄清透明的超低分子量透明質(zhì)酸鈉水溶液；(2)使用含有超濾膜包的超濾系統(tǒng)處理步驟(1)得到的超低分子量透明質(zhì)酸鈉溶液，收集透出液；其中超濾膜包的截留分子量為超低分子量透明質(zhì)酸鈉平均分子量的約2～5倍；(3)得到內(nèi)毒素含量低于0.005EU/mg的超低分子量透明質(zhì)酸鈉純品。本發(fā)明步驟少，操作簡單，處理量大；所用溶劑不涉及有機(jī)溶液，不產(chǎn)生廢液，環(huán)保；有利于工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)，具有廣泛的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種去除超低分子量透明質(zhì)酸鈉中內(nèi)毒素的方法，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

透明質(zhì)酸(鈉)又名玻尿酸、玻璃酸，是一種酸性粘多糖，由D-葡萄糖醛酸以及N-乙酰氨基葡萄糖組成的雙糖單位構(gòu)成的大型多糖類。其大量存在于生物體內(nèi)的許多組織，例如皮下組織、眼球、關(guān)節(jié)等。與其他多糖類相比較，透明質(zhì)酸不含硫，其分子能攜帶500倍以上的水分，是當(dāng)今公認(rèn)的最佳保濕成分，廣泛應(yīng)用于化妝品、保健品、食品、醫(yī)療美容和醫(yī)藥等領(lǐng)域中。

透明質(zhì)酸根據(jù)分子量的不同可以分為多種類型：分子量大于1000KDa的為高分子量透明質(zhì)酸鈉，分子量介于100KDa到1000KDa的為中等分子量透明質(zhì)酸鈉，分子量在10～100KDa的為低分子量透明質(zhì)酸鈉，分子量小于10KDa的為超低分子量透明質(zhì)酸鈉或寡聚透明質(zhì)酸鈉。其中超低分子量透明質(zhì)酸鈉滲透性強(qiáng)，可以深入真皮內(nèi)部，長久保濕。同時(shí)可有效消除紫外線照射誘導(dǎo)的活性氧自由基(ROS)，增強(qiáng)細(xì)胞抗氧化能力，提升肌膚對紫外線的防御力，進(jìn)而減少皺紋，抗衰老。

透明質(zhì)酸鈉的細(xì)菌內(nèi)毒素主要來源于產(chǎn)品生產(chǎn)過程中使用物料以及環(huán)境中可能引入的革蘭氏陰性菌，菌體自溶或被裂解時(shí)產(chǎn)生細(xì)菌內(nèi)毒素。目前利用微生物培養(yǎng)酶解純化得到的透明質(zhì)酸鈉粗品中含有大量對人體有危害的內(nèi)毒素，雖然其毒性比較弱，但仍然可以引起發(fā)熱、微循環(huán)障礙、內(nèi)毒素休克及播散性血管內(nèi)凝血等不良反應(yīng)。為了保證使用上的安全性，需要嚴(yán)格控制去除內(nèi)毒素，以達(dá)到化妝品、保健品、食品、醫(yī)療美容和醫(yī)藥等領(lǐng)域中內(nèi)毒素含量標(biāo)準(zhǔn)。國家藥品標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定，透明質(zhì)酸鈉中含內(nèi)毒素的量：眼內(nèi)注射用應(yīng)小于0.5EU/mg，關(guān)節(jié)內(nèi)注射用應(yīng)小于0.05EU/mg。目前行業(yè)內(nèi)的內(nèi)毒素水平普遍按照藥典標(biāo)準(zhǔn)控制在小于0.05EU/mg。

目前高分子量或中等分子量透明質(zhì)酸鈉基本通過醇沉工藝去除內(nèi)毒素，高分子量或中等分子量透明質(zhì)酸鈉加水后形成透明膠狀，流動相極差，并不適合采用超濾工藝去除內(nèi)毒素。如工藝中有涉及超濾工藝，基本都是采用超濾膜用來濃縮反應(yīng)液、脫鹽或分離目的，并非是去除內(nèi)毒素作用。超低分子量透明質(zhì)酸鈉，因?yàn)榉肿恿康停詷O強(qiáng)，溶解度極高，甚至低濃度溶液可以溶于無水乙醇，并不適合采用醇沉工藝去除內(nèi)毒素。

而去除平均分子量低于10KDa的超低分子量透明質(zhì)酸鈉中內(nèi)毒素的文獻(xiàn)報(bào)道較少，因此對于平均分子量低于10KDa的超低分子量透明質(zhì)酸鈉中的內(nèi)毒素控制是一個(gè)技術(shù)難點(diǎn)。中國專利CN201910785756.4公開了一種去除寡聚透明質(zhì)酸鈉中內(nèi)毒素的方法，此法先用氫氧化鈉和氯化鈉與寡聚透明質(zhì)酸鈉共處理攪拌，再用乙醇醇沉干燥得到內(nèi)毒素小于0.05EU/mg的樣品。該法采用了有機(jī)溶劑乙醇和強(qiáng)堿氫氧化鈉，存在較大的危險(xiǎn)性，有機(jī)溶劑廢液處理麻煩，成本較高，單次處理量少，生產(chǎn)周期長等問題。

因此有必要開發(fā)一種新的制備方法來控制超低分子量透明質(zhì)酸鈉中的內(nèi)毒素含量在較低范圍內(nèi)。

發(fā)明內(nèi)容

鑒于現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明的目的在于提供一種安全、簡單、成本低、處理量大的方法來去除平均分子量低于10KDa的超低分子量透明質(zhì)酸鈉中的內(nèi)毒素。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案：

一種去除超低分子量透明質(zhì)酸鈉中內(nèi)毒素的方法，包括以下步驟：