[發(fā)明專利]用于檢測EGFR基因的引物探針組合及試劑盒和方法

在審

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• 申請日: 2022-12-16
• 公開（公告）號: CN115838807A
• 公開（公告）日: 2023-03-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王會敏;徐容;葛光君;趙嘉麗;王云沁;黃藝萌
• 申請（專利權(quán)）人: 臻準(zhǔn)生物科技（上海）有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 上海光華專利事務(wù)所(普通合伙) 31219
• 代理人: 聶月美;許亦琳

1.用于檢測EGFR基因的引物探針組合，其特征在于，包括用于檢測T790M的突變型引物和突變型探針，以及野生型探針；

所述突變型引物的序列包括如SEQ ID NO.1所示序列和SEQ ID NO.2所示序列；

所述突變型探針的序列包括如SEQ ID NO.3所示序列；

所述野生型探針的序列包括如SEQ ID NO.4所示序列。

2.如權(quán)利要求1所述的引物探針組合，其特征在于，所述引物探針組合還包括封阻探針；優(yōu)選地，所述封阻探針的序列包括如SEQ ID NO.5所示序列。

3.如權(quán)利要求1所述的引物探針組合，其特征在于，所述突變型探針和所述野生型探針的兩端均分別標(biāo)記熒光基團和淬滅基團，且所述突變型探針和所述野生型探針上標(biāo)記的熒光基團不相同。

4.如權(quán)利要求3所述的引物探針組合，其特征在于，所述熒光基團選自FAM、HEX、ROX和CY5中的一種；優(yōu)選地，所述突變型探針上標(biāo)記的熒光基團選自FAM；優(yōu)選地，所述野生型探針上標(biāo)記的熒光基團選自HEX；

和/或，所述淬滅基團選自MGB、BHQ1和BHQ2中的一種。

5.如權(quán)利要求1—4任一項所述的引物探針組合在制備檢測產(chǎn)品中的用途；優(yōu)選地，所述檢測產(chǎn)品為EGFR-TKI耐藥性檢測產(chǎn)品。

6.一種檢測EGFR基因的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包含如權(quán)利要求1—4任一項所述的引物探針組合。

7.如權(quán)利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品、PCR反應(yīng)預(yù)混液和表面活性劑中的一種或多種；優(yōu)選地，所述PCR反應(yīng)預(yù)混液包含PCR緩沖液、dPCR酶、dNTPs和水中的一種或多種；

和/或，所述突變型引物的兩條引物在反應(yīng)體系的濃度為200～500nM；

和/或，所述野生型探針在反應(yīng)體系的濃度為200～500nM；

和/或，所述突變型探針在反應(yīng)體系的濃度為200～500nM；

和/或，所述封阻探針在反應(yīng)體系的濃度為200～500nM。

8.如權(quán)利要求7所述的試劑盒，其特征在于，所述dPCR酶包括Taq酶和UDG酶中的一種或兩種；

和/或，所述PCR緩沖液包括Tris-HCl、氯化鉀、硫酸銨和氯化鎂；

和/或，所述表面活性劑選自吐溫-20；優(yōu)選地，所述表面活性劑在反應(yīng)體系中的濃度不低于0.01wt％。

9.一種檢測EGFR基因突變的方法，包括以下步驟：

1)提供基因組DNA；

2)采用如權(quán)利要求1—4任一項所述的引物探針組合對所述基因組DNA進行PCR擴增，得到PCR產(chǎn)物；

3)對所述PCR產(chǎn)物進行分析，通過熒光信號位置和強度檢測T790M突變型和野生型，并對其進行定量。

10.如權(quán)利要求1—4任一項所述的引物探針組合或如權(quán)利要求6-8任一項所述的試劑盒或如權(quán)利要求9所述的方法在制備檢測EGFR基因突變或耐藥性的產(chǎn)品或篩選腫瘤藥物中的用途。