[發明專利]一種以金銀花花藥為外植體的再生方法

有效

• 申請號: 202211619800.2
• 申請日: 2022-12-15
• 公開（公告）號: CN115843690B
• 公開（公告）日: 2023-08-08
• 發明（設計）人: 劉迪;甄軍波;劉琳琳;歐陽艷飛;任子蓓;任士福;遲吉娜;周英書
• 申請（專利權）人: 河北省農林科學院棉花研究所（河北省農林科學院特種經濟作物研究所）
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 河北知亦可為專利代理事務所(特殊普通合伙) 13115
• 代理人: 陸文舒

本發明涉及植物組織培養技術領域，提出了一種以金銀花花藥為外植體的再生方法，包括以下步驟：S1、制備愈傷組織誘導培養基M1、愈傷組織誘導培養基M2、分化培養基、生根培養基；S2、獲取金銀花外植體并滅菌，得到金銀花花藥；S3、將金銀花花藥于愈傷組織誘導培養基M1中培養后于愈傷組織誘導培養基M2繼代培養至產生胚性愈傷組織；S4、將胚性愈傷組織進行分化培養至形成再生植株，將再生植株轉接到生根培養基培養，得到金銀花組培苗。本發明提供的培養方法可直接誘導金銀花花藥產生胚性愈傷組織，簡化了生產步驟，縮短了成苗的時間。利用本發明得到的胚性愈傷組織和再生苗方法可用于金銀花的基因編輯研究和新品種選育。

技術領域

本發明涉及植物組織培養技術領域，具體的，涉及一種以金銀花花藥為外植體的再生方法。

背景技術

金銀花(Lonicera?japonica)，為忍冬科忍冬屬植物，因花開初時為白色，兩三天后變為黃色，黃白花同時存在，故名金銀花。金銀花是一種藥食兩用植物，是我國重要的傳統大宗中藥材，其主要有效成分為綠原酸和類黃酮等，具有清熱解毒、消炎除火、保肝利膽等功效，用于治療風熱感冒、溫病、咽喉腫痛肺炎、痢疾、痛腫潰瘍等癥，具有極大的市場需求。目前金銀花的主要栽培方式為大田種植，扦插繁殖等，不僅育苗周期長、受季節限制、易感病菌，還易使金銀花生長不良，藥用有效成分積累減少，造成產品品質的下降。

前人關于金銀花組培的研究，多以莖尖、莖段、芽等為外植體，已公開的發明專利申請號201110292502.2和201210509936.8就以莖段作為外植體進行金銀花的快繁，且主要產生叢生芽，只在基部產生少量愈傷組織。經檢索尚未見以金銀花花藥為外植體進行組織培養，并產生胚性愈傷組織的報道。另外，金銀花作為忍冬科屬植物，常用的植物生長調劑為主要為IBA、NAA和6-BA，本發明的植物生長調節劑組合在金銀花組織培養過程中幾乎未見報道。

發明內容

針對現有技術存在的問題，本發明以金銀花花藥為外植體，通過調整誘導培養基成分、優化誘導培養條件等，最終提供了一種金銀花花藥培養直接誘導出胚性愈傷組織并生成植株的方法。

本發明的技術方案如下：

一種以金銀花花藥為外植體的再生方法，包括以下步驟：

S1、制備愈傷組織誘導培養基M1、愈傷組織誘導培養基M2、分化培養基、生根培養基；

S2、獲取金銀花外植體并滅菌，收集金銀花花藥；

S3、將金銀花花藥于愈傷組織誘導培養基M1中培養后，于愈傷組織誘導培養基M2繼代培養至產生胚性愈傷組織；

S4、將胚性愈傷組織進行分化培養至形成再生植株，將再生植株轉接到生根培養基培養，得到金銀花組培苗。

作為進一步的技術方案，所述愈傷組織誘導培養基M1以MS為基本培養基，添加葡萄糖25～35g/L，植物凝膠2.0～3.0g/L，2,4-D?0.05～0.15mg/L，IAA0.1～0.5mg/L，KT0.05～0.15mg/L，并調pH值為5.8；

所述愈傷組織誘導培養基M2以MS為基本培養基，添加葡萄糖25～35g/L，植物凝膠2.0～3.0g/L，IAA0.1～0.6mg/L，KT?0.2-0.6mg/L，并調pH值為5.8。