[發明專利]一種以金銀花花藥為外植體的再生方法

有效

• 申請號: 202211619800.2
• 申請日: 2022-12-15
• 公開（公告）號: CN115843690B
• 公開（公告）日: 2023-08-08
• 發明（設計）人: 劉迪;甄軍波;劉琳琳;歐陽艷飛;任子蓓;任士福;遲吉娜;周英書
• 申請（專利權）人: 河北省農林科學院棉花研究所（河北省農林科學院特種經濟作物研究所）
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 河北知亦可為專利代理事務所(特殊普通合伙) 13115
• 代理人: 陸文舒

1.一種以金銀花花藥為外植體的再生方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、制備愈傷組織誘導培養基M1、愈傷組織誘導培養基M2、分化培養基、生根培養基；

S2、獲取金銀花外植體并滅菌，收集金銀花花藥；

S3、將金銀花花藥于愈傷組織誘導培養基M1中培養后，于愈傷組織誘導培養基M2繼代培養至產生胚性愈傷組織；

S4、將胚性愈傷組織在分化培養基上分化培養至形成再生植株，將再生植株轉接到生根培養基培養，得到金銀花組培苗；

所述愈傷組織誘導培養基M1以MS為基本培養基，添加葡萄糖25~35g/L，植物凝膠2.0~3.0g/L，?2,4-D?0.05~0.15mg/L，IAA?0.1~0.5mg/L，KT?0.05~0.15mg/L，并調pH值為5.8；

所述愈傷組織誘導培養基M2以MS為基本培養基，添加葡萄糖25~35g/L，植物凝膠2.0~3.0g/L，IAA?0.1~0.6?mg/L，KT?0.2~0.6mg/L，并調pH值為5.8；

所述分化培養基包括：硝酸鉀?1900?mg/L，硝酸鎂?320?mg/L，硝酸銨?250?mg/L，磷酸二氫鉀?170?mg/L，硫酸銨?220?mg/L，二水氯化鈣?400?mg/L，磷酸二氫鈉?40?mg/L，七水硫酸亞鐵?27.8?mg/L，乙二胺四乙酸二鈉?37.3?mg/L，六水氯化鈷?0.025?mg/L，五水硫酸銅0.025?mg/L，碘化鉀?0.83?mg/L，七水硫酸鋅?8.6?mg/L，硼酸?6.2?mg/L，四水硫酸錳?22.3mg/L，二水鉬酸鈉?0.25?mg/L，肌醇?100?mg/L，硫胺素?0.1?mg/L，鹽酸吡哆醇?0.5?mg/L，煙酸?0.5?mg/L，甘氨酸?2?mg/L，谷氨酰胺?1000?mg/L，天冬酰胺?500?mg/L，葡萄糖?30?g/L，IBA?0.2~0.6mg/L，KT?0.10~0.20mg/L，植物凝膠2.5~2.8?g/L，并調節pH值為5.9。

2.?根據權利要求1所述的一種以金銀花花藥為外植體的再生方法，其特征在于，所述生根培養基包括：硝酸鉀?950?mg/L，硝酸鎂?160?mg/L，硝酸銨?125?mg/L，磷酸二氫鉀?85mg/L，硫酸銨?110?mg/L，二水氯化鈣?200?mg/L，磷酸二氫鈉?20?mg/L，七水硫酸亞鐵?27.8mg/L，乙二胺四乙酸二鈉?37.3?mg/L，六水氯化鈷?0.025?mg/L，五水硫酸銅?0.025?mg/L，碘化鉀?0.83?mg/L，七水硫酸鋅?8.6?mg/L，硼酸?6.2?mg/L，四水硫酸錳?22.3?mg/L，二水鉬酸鈉?0.25?mg/L，肌醇?100?mg/L，硫胺素?0.1?mg/L，鹽酸吡哆醇?0.5?mg/L，煙酸?0.5mg/L，肌醇?100?mg/L，甘氨酸?2?mg/L，葡萄糖?30?g/L，植物凝膠2.0~3.0g/L，并調節pH值為5.9。

3.根據權利要求1所述的一種以金銀花花藥為外植體的再生方法，其特征在于，所述步驟S2獲取外植體和滅菌的方法為，取下金銀花枝條的花蕾，于0.1%的升汞溶液中滅菌處理后，經無菌水清洗至去除升汞，將花蕾放到滅菌的濾紙上，取出內部花藥，花藥為鵝黃色或黃綠色。

4.根據權利要求3所述的一種以金銀花花藥為外植體的再生方法，其特征在于，所述取下的花蕾呈棒狀，顏色為黃白或綠白色。

5.根據權利要求1所述的一種以金銀花花藥為外植體的再生方法，其特征在于，所述步驟S3胚性愈傷組織誘導為，將獲取的金銀花花藥接種到愈傷組織誘導培養基M1上，培養20天后繼代到愈傷組織誘導培養基M2上，每20天繼代1次，繼代培養2-3次直至產生胚性愈傷組織，胚性愈傷組織呈黃色、顆粒狀。

6.根據權利要求5所述的一種以金銀花花藥為外植體的再生方法，其特征在于，所述將金銀花花藥接種到愈傷組織誘導培養基M1的培養條件為：培養溫度24~26℃，暗光或弱光培養；繼代到愈傷組織誘導培養基M2的培養條件為，培養溫度24~26℃，光照時間每天10-12小時。