[發(fā)明專利]結(jié)直腸癌SDC2甲基化檢測(cè)引物、探針、試劑盒及方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202211609009.3
• 申請(qǐng)日: 2022-12-14
• 公開（公告）號(hào): CN116254338A
• 公開（公告）日: 2023-06-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳剛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 福建省腫瘤醫(yī)院（福建省腫瘤研究所;福建省癌癥防治中心）
• 主分類號(hào): C12Q1/6886
• 分類號(hào): C12Q1/6886;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 福州市博深專利事務(wù)所(普通合伙) 35214
• 代理人: 謝子能

1.一種結(jié)直腸癌SDC2甲基化檢測(cè)的引物和探針，其特征在于，引物為SDC2cgA引物和/或SDC2?cgB引物，探針為SDC2?cgA探針和/或SDC2?cgB探針；

所述SDC2?cgA引物由SEQ?ID?NO:1～SEQ?ID?NO:3中任意一個(gè)引物和SEQ?ID?NO:4～SEQ?ID?NO:6中任意一個(gè)引物組成；

所述SDC2?cgB引物由SEQ?ID?NO:13～SEQ?ID?NO:15中任意一個(gè)引物和SEQ?ID?NO:16～SEQ?ID?NO:18中任意一個(gè)引物組成；

所述SDC2?cgA探針由SEQ?ID?NO:7～SEQ?ID?NO:9中任意一個(gè)探針和SEQ?ID?NO:10～SEQ?ID?NO:12中任意一個(gè)探針組成；

所述SDC2?cgB探針為SEQ?ID?NO:19～SEQ?ID?NO:21中任意一個(gè)探針。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的結(jié)直腸癌SDC2甲基化檢測(cè)的引物和探針，其特征在于，所述探針的3＇端皆標(biāo)記有MGB淬滅基團(tuán)，所述SEQ?ID?NO:7～SEQ?IDNO:9和SEQ?ID?NO:19～SEQ?IDNO:21的5＇端標(biāo)記有FAM熒光報(bào)告基團(tuán)，所述SEQ?ID?NO:10～SEQ?ID?NO:12的5＇端標(biāo)記有VIC熒光報(bào)告基團(tuán)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的結(jié)直腸癌SDC2甲基化檢測(cè)的引物和探針，其特征在于，所述引物由SEQ?ID?NO:3、SEQ?ID?NO:6、SEQ?ID?NO:14和SEQ?IDNO:18組成，所述探針由SEQ?IDNO:8、SEQ?ID?NO:11和SEQ?ID?NO:20組成。

4.一種結(jié)直腸癌SDC2甲基化檢測(cè)的試劑盒，其特征在于，包括權(quán)利要求1～3任一項(xiàng)所述的引物和探針。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的結(jié)直腸癌SDC2甲基化檢測(cè)的試劑盒，其特征在于，還包括內(nèi)參引物和內(nèi)參探針，所述內(nèi)參引物由SEQ?ID?No.22和SEQ?ID?No.23兩個(gè)引物組成，所述內(nèi)參探針為SEQ?ID?No.24所示探針。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的結(jié)直腸癌SDC2甲基化檢測(cè)的試劑盒，其特征在于，還包括2×qPCR?Master?Mix、模板DNA和DEPC水。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的結(jié)直腸癌SDC2甲基化檢測(cè)的試劑盒，其特征在于，所述模板DNA的具體制備方法為：樣品提取核酸DNA后，再對(duì)核酸DNA進(jìn)行甲基化處理，得到模板DNA。

8.一種結(jié)直腸癌SDC2甲基化檢測(cè)的方法，其特征在于，使用權(quán)利要求4所述的結(jié)直腸癌SDC2甲基化檢測(cè)的試劑盒進(jìn)行熒光PCR檢測(cè)，評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)為：

內(nèi)參基因的Ct值≤37，甲基化SDC2基因Ct值≤38時(shí)判斷樣本為陽性；內(nèi)參基因的Ct值≤37，甲基化SDC2基因FAM通道Ct值＞38時(shí)判定為陰性樣本；內(nèi)參基因Ct值＞37或者無Ct值時(shí)，判定為樣本不合格。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的結(jié)直腸癌SDC2甲基化檢測(cè)的方法，其特征在于，所述熒光PCR檢測(cè)的反應(yīng)程序?yàn)椋?5℃預(yù)變性5min；95℃15s，55℃10s，45次循環(huán)；末端檢測(cè)FAM通道和VIC通道。