[發明專利]一種溶菌酶制劑及其生產方法與應用

在審

• 申請號: 202211585320.9
• 申請日: 2022-12-11
• 公開（公告）號: CN115887628A
• 公開（公告）日: 2023-04-04
• 發明（設計）人: 舒德偉;方磊;顏濤;劉星;安冉
• 申請（專利權）人: 棗莊健袖生物醫藥有限公司
• 主分類號: A61K38/47
• 分類號: A61K38/47;A61K47/36;A61K47/06;A61P1/02;C12N9/36
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1.一種溶菌酶制劑，其特征在于，所述溶菌酶制劑包括以下重量份的原料：溶菌酶20-45份、包衣緩釋劑10-25份、西瓜紅10-20份、茯苓5-20份、白術5-10份、液體石蠟20-40份；

所述包衣緩釋劑由海藻酸鈉與端氨基聚N-異丙基丙烯酰胺經共價連接制得。

2.根據權利要求1所述的一種溶菌酶制劑，其特征在于，所述共價連接的方法為：向30mL濃度為0.1mol/L的磷酸鹽緩沖液中加入1g海藻酸鈉、0.25g的1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和0.02g的N-羥基琥珀酰亞胺，混勻，繼續加入0.2g端氨基聚N-異丙基丙烯酰胺，機械攪拌均勻，調節溶液pH為5，置于20℃的水浴鍋中反應16h，產物經透析、冷凍干燥和提純步驟，得到包衣緩釋劑。

3.根據權利要求1所述的一種溶菌酶制劑，其特征在于，所述溶菌酶的生產方法包括以下步驟：

（1）將活化的產溶菌酶菌株S-12-86接種于產酶培養基中，置于28℃的恒溫搖床上，以150-200r/min的振蕩頻率培養12-24h，使用紗布對其進行過濾，除去不溶物，使用pH為4-5的醋酸-醋酸鈉緩沖液將濾液稀釋100倍，離心分離出上清液；

（2）將10-20mL步驟（1）中分離得到的上清液倒入反應器中，混勻，使用濃度為0.001mol/L的氫氧化鈉溶液調節溶液pH為10-11，加入亞氨基二乙酸磁性微球，在15-35℃下振蕩吸附2-4h，去除上清液，得到負載溶菌酶的磁性微球；

（3）使用pH為7-8的氯化鈉緩沖液對步驟（2）制備的負載溶菌酶的磁性微球進行洗滌脫附，設置振蕩溫度為15-35℃，時間為2-6h，脫附結束后磁分離取上清液，得到溶菌酶。

4.根據權利要求3所述的一種溶菌酶制劑，其特征在于，所述步驟（2）中亞氨基二乙酸磁性微球的加入量為0.02-0.04g。

5.根據權利要求3所述的一種溶菌酶制劑，其特征在于，所述亞氨基二乙酸磁性微球的生產方法包括以下步驟：

S1：向40-80mL甲苯溶劑中加入1g納米四氧化三鐵，超聲分散20-40min，繼續加入2-8mL的3-氯丙基三乙氧基硅烷，機械攪拌均勻后，置于80-100℃的油浴鍋中反應12-24h，反應結束后抽濾，得固體樣品，用去離子水進行洗滌2-3次，真空干燥，得到含氯四氧化三鐵；

S2：向乙腈溶劑中加入步驟S2中制備的含氯四氧化三鐵，超聲分散均勻，繼續加入亞氨基二乙酸和碳酸鉀，混勻，置于油浴鍋中進行反應，反應結束后離心分離固體產物，洗滌，真空干燥，得到亞氨基二乙酸磁性微球。

6.根據權利要求5所述的一種溶菌酶制劑，其特征在于，所述步驟S2中油浴鍋中的溫度為60-80℃，反應時間為6-18h。

7.根據權利要求5所述的一種溶菌酶制劑，其特征在于，所述步驟S2反應過程中使用以下重量份的原料：乙腈溶劑300-600份、含氯四氧化三鐵10份、亞氨基二乙酸2-5份、碳酸鉀3-8份。

8.如權利要求1所述的一種溶菌酶制劑的生產工藝，其特征在于，所述生產工藝包括以下步驟：

A1：向200-450mL去離子水中加入包衣緩釋劑和溶菌酶，混勻后，使用醫用五號針將其加入40-60mL濃度為0.25mol/L的氯化鈣溶液中，滴加完畢后，反應4-10min，過濾，用去離子水洗滌2-4次，干燥，得到溶菌酶微囊；

A2：將西瓜紅、茯苓和白術過80-100目篩，并與步驟A1中制備的溶菌酶微囊攪拌混勻，得到預混物；

A3：將步驟A2中制備的預混物加入液體石蠟中，攪拌混合均勻，得到溶菌酶制劑。

9.根據權利要求1-7任意一項所述的一種溶菌酶制劑的應用，其特征在于，將制得的所述溶菌酶制劑應用于口腔潰瘍的治療領域。