[發明專利]一種快速檢測鱘魚感染海分枝桿菌的方法

在審

• 申請號: 202211580227.9
• 申請日: 2022-12-09
• 公開（公告）號: CN115951052A
• 公開（公告）日: 2023-04-11
• 發明（設計）人: 許巧情;謝夢;余婷;李騫;郭慧芝;周江;羅凱
• 申請（專利權）人: 長江大學
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/68
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 黃明光

1.一種快速檢測鱘魚感染海分枝桿菌的方法，其特征在于，包括如下步驟：誘導表達海分枝桿菌毒力蛋白，將毒力蛋白與鱘魚血液混合，混合液作為檢測樣品，未加入毒力蛋白的鱘魚血液作為本底對照樣品，檢測兩種樣品中IFN-γ蛋白濃度，若檢測樣品-本底對照樣品≥14pg/mL，判定為陽性，若檢測樣品-本底對照樣品＜14pg/mL，判定為陰性。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述毒力蛋白為Ag85B蛋白、Rpf蛋白中的一種或多種。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述誘導表達海分枝桿菌毒力蛋白的方法包括：將Ag85B陽性菌菌液和Rpf陽性菌菌液添加于含卡那霉素的LB培養基，培養，添加IPTG誘導重組蛋白的表達。

4.如權利要求3所述的方法，其特征在于，所述IPTG的添加量為0.4～1.2mmol/L。

5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，將毒力蛋白與鱘魚血液混合液和鱘魚血液放入25～30℃的培養箱中孵育20～24h。

6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述IFN-γ蛋白濃度的檢測方法為間接夾心ELISA法。

7.如權利要求6所述的方法，其特征在于，所述間接夾心ELISA法以兔源IFN-γ多抗作為捕獲抗體，再以鼠源IFN-γ多抗作為檢測抗體。

8.如權利要求7所述的方法，其特征在于，所述鼠源IFN-γ多抗的制備方法包括如下步驟：用IFN-γ蛋白免疫小鼠三次，第25～30天收集小鼠血清樣本，用硫酸銨鹽析法純化IFN-γ多抗，即得鼠源IFN-γ多抗。

9.如權利要求7所述的方法，其特征在于，所述鼠源IFN-γ多抗需稀釋至1:1000～1:3000。