[發(fā)明專利]用于制備伊氏殺線真菌孢子粉的培養(yǎng)基及伊氏殺線真菌孢子粉的制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202211567108.X
• 申請(qǐng)日: 2022-12-07
• 公開（公告）號(hào): CN115851453A
• 公開（公告）日: 2023-03-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 理永霞;溫曉健;王璇;劉振凱;李東振;張偉;馮宇倩;張星耀
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院森林生態(tài)環(huán)境與自然保護(hù)研究所
• 主分類號(hào): C12N1/14
• 分類號(hào): C12N1/14;C12N3/00;C12N1/04;A01N63/30;A01P5/00;C12R1/645
• 代理公司: 蘇州錦尚知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 32502
• 代理人: 翁亞娜;滕錦林

本發(fā)明涉及一種用于制備伊氏殺線真菌孢子粉的培養(yǎng)基及伊氏殺線真菌孢子粉的制備方法。本發(fā)明用于制備伊氏殺線真菌孢子粉的培養(yǎng)基，按重量百分比包括如下組分：葡萄糖2?3％，酵母浸粉0.5?1％，蛋白胨0.1?0.5％，無機(jī)鹽0.4?0.8％，余量為水。本發(fā)明提供的培養(yǎng)基及制備方法可獲得高濃度的孢子懸浮液和高活性的孢子粉，同時(shí)獲得的孢子粉便于儲(chǔ)存和運(yùn)輸，且可以進(jìn)一步加工成不同類型的劑型用于松材線蟲病的防治。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種用于制備伊氏殺線真菌孢子粉的培養(yǎng)基及伊氏殺線真菌孢子粉的制備方法。

背景技術(shù)

松材線蟲是全球重大檢疫性有害生物，自1982年入侵我國(guó)，發(fā)生范圍不斷擴(kuò)大，年發(fā)生面積超2000萬畝，累計(jì)引起死樹6億多株，造成的直接經(jīng)濟(jì)損失數(shù)千億元，間接經(jīng)濟(jì)損失和生態(tài)破壞更是難以計(jì)數(shù)。目前松材線蟲病的防治措施主要以疫木清理為主，對(duì)疫木進(jìn)行粉碎、燒毀、熏蒸等處理，其次是噴灑化學(xué)藥劑殺滅媒介昆蟲，樹干注射甲維鹽等防治松材線蟲，以及選育抗性樹種等，雖然取得了一定的成果，但是存在化學(xué)藥劑污染環(huán)境、樹干注射方法不宜大規(guī)模應(yīng)用，抗病樹種選育進(jìn)程慢，媒介昆蟲控制應(yīng)急性差等問題。

伊氏殺線真菌Esteya vermicola是世界上第一個(gè)被報(bào)道的松材線蟲內(nèi)寄生真菌，對(duì)松材線蟲表現(xiàn)出高侵染性和寄生率，在林間也被證明具有一定的預(yù)防效果，具有作為松材線蟲病生物防治劑的前景和潛力。

目前，制約伊氏殺線真菌大規(guī)模應(yīng)用的主要問題在于現(xiàn)有培養(yǎng)方法產(chǎn)孢量低，孢子懸浮液保存時(shí)間短，易受到污染。因此，提供一種提高Esteya vermicola產(chǎn)孢量并延長(zhǎng)孢子懸浮液保存時(shí)間的制備方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員亟需解決的問題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種用于制備伊氏殺線真菌孢子粉的培養(yǎng)基及伊氏殺線真菌孢子粉的制備方法，可獲得高濃度的孢子懸浮液和高活性的孢子粉，同時(shí)孢子粉易于儲(chǔ)存和運(yùn)輸，對(duì)松材線蟲病的防治具有廣闊的應(yīng)用前景。

為解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：

一種用于制備伊氏殺線真菌孢子粉的培養(yǎng)基，按重量百分比包括如下組分：葡萄糖2-3％，酵母浸粉0.5-1％，蛋白胨0.1-0.5％，無機(jī)鹽0.4-0.8％，余量為水。

優(yōu)選地，無機(jī)鹽選自氯化鈉、氯化鉀、碳酸鈣、硫酸銨、硝酸鉀、磷酸二氫鉀、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鉀、氯化鈣、硫酸鎂、硫酸亞鐵的一種或多種；優(yōu)選地，培養(yǎng)基的pH為6-7，優(yōu)選為6.5。

優(yōu)選地，按重量百分比由如下組分組成：葡萄糖2-3％，酵母浸粉0.5-1％，蛋白胨0.1-0.5％，氯化鈣0.4-0.6％，磷酸氫二鉀0.01-0.05％，硫酸鎂0.03-0.06％，硫酸亞鐵0.01-0.05％，余量為水。

優(yōu)選地，按重量百分比由如下組分組成：葡萄糖2％，酵母浸粉0.5％，蛋白胨0.1％，氯化鈣0.5％，磷酸氫二鉀0.01％，硫酸鎂0.05％，硫酸亞鐵0.01％，余量為水。

優(yōu)選地，伊式殺線真菌的菌株編號(hào)為Fxy121，保藏編號(hào)為CGMCCNo.20215。

為解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明采取的又一技術(shù)方案是：

一種伊氏殺線真菌孢子懸浮液的制備方法，包括以下步驟：

(1)活化：將保存的伊氏殺線真菌菌株接種于馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上活化培養(yǎng)，獲得該菌株的菌餅；

(2)培養(yǎng)：將權(quán)利要求1-5的培養(yǎng)基滅菌，接種步驟(1)獲得的菌餅，在溫度為25-28℃，轉(zhuǎn)速為180-220rpm/min的條件下無光照培養(yǎng)5-7天，獲得孢子懸浮液。

優(yōu)選地，步驟(2)中將權(quán)利要求1-5的培養(yǎng)基裝入三角瓶滅菌，接種步驟(1)獲得的菌餅，容量為1L的三角瓶中裝液量為400mL，接種量為直徑5mm的菌餅4-5塊；