[發(fā)明專(zhuān)利]用于制備伊氏殺線(xiàn)真菌孢子粉的培養(yǎng)基及伊氏殺線(xiàn)真菌孢子粉的制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202211567108.X
• 申請(qǐng)日: 2022-12-07
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN115851453A
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-03-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 理永霞;溫曉健;王璇;劉振凱;李東振;張偉;馮宇倩;張星耀
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院森林生態(tài)環(huán)境與自然保護(hù)研究所
• 主分類(lèi)號(hào): C12N1/14
• 分類(lèi)號(hào): C12N1/14;C12N3/00;C12N1/04;A01N63/30;A01P5/00;C12R1/645
• 代理公司: 蘇州錦尚知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 32502
• 代理人: 翁亞娜;滕錦林

1.一種用于制備伊氏殺線(xiàn)真菌孢子粉的培養(yǎng)基，其特征在于，按重量百分比包括如下組分：葡萄糖2-3％，酵母浸粉0.5-1％，蛋白胨0.1-0.5％，無(wú)機(jī)鹽0.4-0.8％，余量為水。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于制備伊氏殺線(xiàn)真菌孢子粉的培養(yǎng)基，其特征在于，所述無(wú)機(jī)鹽選自氯化鈉、氯化鉀、碳酸鈣、硫酸銨、硝酸鉀、磷酸二氫鉀、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鉀、氯化鈣、硫酸鎂、硫酸亞鐵的一種或多種；

優(yōu)選地，培養(yǎng)基的pH為6-7，優(yōu)選為6.5。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于制備伊氏殺線(xiàn)真菌孢子粉的培養(yǎng)基，其特征在于，按重量百分比由如下組分組成：葡萄糖2-3％，酵母浸粉0.5-1％，蛋白胨0.1-0.5％，氯化鈣0.4-0.6％，磷酸氫二鉀0.01-0.05％，硫酸鎂0.03-0.06％，硫酸亞鐵0.01-0.05％，余量為水。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于制備伊氏殺線(xiàn)真菌孢子粉的培養(yǎng)基，其特征在于，按重量百分比由如下組分組成：葡萄糖2％，酵母浸粉0.5％，蛋白胨0.1％，氯化鈣0.5％，磷酸氫二鉀0.01％，硫酸鎂0.05％，硫酸亞鐵0.01％，余量為水。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于制備伊氏殺線(xiàn)真菌孢子粉的培養(yǎng)基，其特征在于，所述伊式殺線(xiàn)真菌的菌株編號(hào)為Fxy121，保藏編號(hào)為CGMCCNo.20215。

6.一種伊氏殺線(xiàn)真菌孢子懸浮液的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)活化：將保存的伊氏殺線(xiàn)真菌菌株接種于馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上活化培養(yǎng)，獲得該菌株的菌餅；

(2)培養(yǎng)：將權(quán)利要求1-5所述的培養(yǎng)基滅菌，接種步驟(1)獲得的菌餅，在溫度為25-28℃，轉(zhuǎn)速為180-220rpm/min的條件下無(wú)光照培養(yǎng)5-7天，獲得孢子懸浮液。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的伊氏殺線(xiàn)真菌孢子懸浮液的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)中將權(quán)利要求1-5所述的培養(yǎng)基裝入三角瓶滅菌，接種步驟(1)獲得的菌餅，容量為1L的三角瓶中裝液量為400mL，接種量為直徑5mm的菌餅4-5塊；

優(yōu)選地，滅菌條件為溫度121℃，壓強(qiáng)105KPa，時(shí)間20min。

8.一種伊氏殺線(xiàn)真菌孢子粉的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

冷凍干燥：將權(quán)利要求6-7中任一項(xiàng)所述步驟(2)獲得的孢子懸浮液經(jīng)低速離心后得到孢子漿，將孢子漿與預(yù)先滅菌的保護(hù)劑溶液混勻，平衡后在真空度為130-180mTorr，溫度為-70至-90℃的條件下冷凍干燥，得到伊氏殺線(xiàn)真菌孢子粉。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的伊氏殺線(xiàn)真菌孢子粉的制備方法，其特征在于，在所述步驟(3)中，在冷凍干燥前先進(jìn)行預(yù)凍；

優(yōu)選地，預(yù)凍溫度為-70至-90℃，預(yù)凍時(shí)間為1-4小時(shí)；

優(yōu)選地，在所述步驟(3)中，所述保護(hù)劑為蔗糖，蔗糖溶液的質(zhì)量濃度為5-10％，優(yōu)選為10％，蔗糖溶液經(jīng)高溫高壓定時(shí)滅菌后再加入；

優(yōu)選地，所述保護(hù)劑溶液與孢子漿的體積比為1-3：1，優(yōu)選為2：1；

優(yōu)選地，低速離心的轉(zhuǎn)速為3000-4000rpm/min；

優(yōu)選地，冷凍干燥的時(shí)間為24-60小時(shí)。

10.根據(jù)權(quán)利要求6-9中任一項(xiàng)所述的制備方法制備得到的孢子懸浮液或孢子粉在控制松材線(xiàn)蟲(chóng)病中的應(yīng)用。