[發(fā)明專利]一種產(chǎn)甾藥前體的基因工程菌及其用途

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202211559077.3
• 申請日: 2022-12-06
• 公開（公告）號: CN116286930A
• 公開（公告）日: 2023-06-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 顧向忠;袁辰陽;葉如飛
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇佳爾科藥業(yè)集團股份有限公司
• 主分類號: C12N15/74
• 分類號: C12N15/74;C12N15/53;C12N1/21;C12P33/00;C07J5/00;C12R1/01
• 代理公司: 常州市天龍專利事務(wù)所有限公司 32105
• 代理人: 于雅潔

1.基因在調(diào)控分枝桿菌產(chǎn)甾藥前體的產(chǎn)量或改造產(chǎn)甾藥前體的分枝桿菌中的用途，其特征在于，所述基因包括編碼羥酰輔酶A脫氫酶的基因和/或3-甾酮-9α-羥化酶A亞基的基因。

2.如權(quán)利要求1所述的基因在調(diào)控分枝桿菌產(chǎn)甾藥前體的產(chǎn)量或改造產(chǎn)甾藥前體的分枝桿菌中的用途，其特征在于，包括如下中的1)-3)中的至少一項：

1)所述編碼3-甾酮-9α-羥化酶A亞基的基因為如下A1)-A4)中的至少一項；

A1)所述基因為kshA1；所述kshA1的核苷酸序列包括如SEQ?ID?NO.1所述序列；

A2)所述基因為kshA2；所述kshA2的核苷酸序列包括如SEQ?ID?NO.2所述序列；

A3)所述基因為kshA3；所述kshA3的核苷酸序列包括如SEQ?ID?NO.3所述序列；

A4)與所述SEQ?ID?NO.1、SEQ?ID?NO.2或SEQ?ID?NO.3所示序列限定的核苷酸序列具有60％或60％以上同源性，且編碼所述3-甾酮-9α-羥化酶A亞基的核苷酸；

2)所述編碼羥酰輔酶A脫氫酶的基因為如下B1)或B2)；

B1)所述基因為hsd4A；所述hsd4A的核苷酸序列包括如SEQ?ID?NO.4所述序列；B2)與所述SEQ?ID?NO.4所示序列限定的核苷酸序列具有60％或60％以上同源性，且編碼如所述羥酰輔酶A脫氫酶的核苷酸；

3)所述甾藥前體選自1,4-雄烯二酮、雄烯二酮、21-羥基-20-甲基孕甾-1，4-二烯-3-酮以及21-羥基-20-甲基孕甾-4-烯-3-酮的一種或多種；優(yōu)選地，為21-羥基-20-甲基孕甾-1，4-二烯-3-酮。

3.如權(quán)利要求1所述的基因在調(diào)控分枝桿菌產(chǎn)甾藥前體的產(chǎn)量或改造產(chǎn)甾藥前體的分枝桿菌中的用途，其特征在于，所述基因還包括編碼3-甾酮-Δ¹-脫氫酶、NADH氧化酶、過氧化物酶的基因中的一種或多種。

4.如權(quán)利要求3所述的基因在調(diào)控分枝桿菌產(chǎn)甾藥前體的產(chǎn)量或改造產(chǎn)甾藥前體的分枝桿菌中的用途，其特征在于，包括如下中的1-1)、1-2)和/或1-3)：

1-1)所述編碼3-甾酮-Δ¹-脫氫酶的基因為如下C1)或C2)；

C1)所述編碼基因為kstd；所述kstd的核苷酸序列包括如SEQ?ID?NO.5所述序列；

C2)與所述SEQ?ID?NO.5所示序列限定的核苷酸序列具有60％或60％以上同源性，且編碼所述3-甾酮-Δ¹-脫氫酶的核苷酸；

1-2)所述編碼NADH氧化酶的基因為如下D1)-D2)中的至少一項；

D1)所述編碼基因為nox；所述nox的核苷酸序列包括如SEQ?ID?NO.6所示序列；

D2)與所述SEQ?ID?NO.6所示序列限定的核苷酸序列具有60％或60％以上同源性，且編碼如所述NADH氧化酶的核苷酸。

1-3)所述編碼過氧化物酶的基因為如下E1)-E2)中的至少一項；

E1)所述編碼基因為kate；所述kate的核苷酸序列包括如SEQ?ID?NO.7所示序列；

E2)與所述SEQ?ID?NO7所示序列限定的核苷酸序列具有60％或60％以上同源性，且編碼如所述過氧化物酶的核苷酸。

5.如權(quán)利要求4所述的基因在調(diào)控分枝桿菌產(chǎn)甾藥前體的產(chǎn)量或改造產(chǎn)甾藥前體的分枝桿菌中的用途，其特征在于，所述羥酰輔酶A脫氫酶、所述過氧化物酶來源于放線菌；

和/或，所述NADH氧化酶來源于芽孢桿菌。

6.如權(quán)利要求1-5任一項所述的基因在調(diào)控分枝桿菌產(chǎn)甾藥前體的產(chǎn)量或改造產(chǎn)甾藥前體的分枝桿菌中的用用途，其特征在于，所述分枝桿菌為新金色分枝桿菌；優(yōu)選地，為新金色分枝桿菌Mycobacterium.neoaurum?DSM?44074。

7.一種產(chǎn)甾藥前體的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌通過敲除分枝桿菌中編碼3-甾酮-9α-羥化酶和/或羥酰輔酶A脫氫酶的基因獲得。