[發明專利]一種鑒別紅松無性系的SSR標記引物組及指紋圖譜的構建方法和應用

有效

• 申請號: 202211550520.0
• 申請日: 2022-12-05
• 公開（公告）號: CN116200521B
• 公開（公告）日: 2023-08-18
• 發明（設計）人: 張含國;閆平玉;張磊;唐杰;趙常海;楊偉財;潘鳳剛;張振;程萬才
• 申請（專利權）人: 東北林業大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所 23109
• 代理人: 李紅媛

一種鑒別紅松無性系的SSR標記引物組及指紋圖譜的構建方法和應用，它涉及SSR分子標記技術領域，本發明提供了SSR標記引物組，并基于其構建指紋圖譜：(1)紅松總DNA提取，(2)利用SSR引物進行PCR擴增，(3)PCR擴增產物毛細管電泳，(4)指紋圖譜構建；其中：步驟(2)利用公開的11對SSR引物進行紅松DNA的PCR擴增，所得產物經毛細管電泳檢測所得的帶型結果，組合形成每個無性系的SSR指紋圖譜，根據指紋圖譜的差異，再區分無性系。本發明可以快速、準確、高效的從分子水平為紅松無性系鑒定、良種選育和遺傳改良提供可靠的依據，為中國紅松遺傳資源保存、評價與利用提供參考。

技術領域

本發明涉及SSR分子標記技術領域，具體涉及一種鑒別紅松無性系的SSR標記引物組及指紋圖譜的構建方法和應用。

背景技術

紅松(Pinμskoraiensis)，松科(Pinaceae)松屬(Pinμs?L)，國家重點保存的二級野生植物，也是我國東北林區的鄉土樹種。原產于我國東北長白山到小興安嶺，常同魚鱗松、紅皮云杉組成混交林。耐寒性強，喜微酸性土或中性土。木材輕軟、細致、紋理直、耐腐蝕性強，為建筑、橋梁、枕木、家具優良用材；樹皮可提取栲膠，樹干可采松脂，是能夠提供木材，紙漿和油脂的良好樹種，此外紅松的果實由于具有非常高的營養價值，含有大量的粗蛋白，粗脂肪，多糖和粗纖維以及維生素，礦物質和微量元素而成為最受歡迎的松仁產品，為產地主要造林樹種，又為觀賞樹。

傳統的林木鑒定主要依靠營養器官和生殖器官的形態性狀差異，受環境和生長階段的影響很大，但是無性系間的形態差異較小，一些外觀形態易受到環境因素的影響，因此難以從形態學上對不同無性系進行鑒定，極易出現無意識的混種、混系等現象，或者有意識的侵權現象，給生產、科研和良種保護及推廣等工作帶來極大的不方便。隨著分子生物學的不斷發展，DNA分子標記被廣泛應用于種質資源鑒定和揭示樹木種內的遺傳多樣性等。

由于SSR標記可以從分子水平進行鑒定，能夠精確到單個核苷酸水平，穩定性高、重復性好、多態性好，更有說服力，而且能夠鑒定所檢測位點是純合還是雜合。合成熒光引物進行PCR擴增，然后用毛細管電泳儀對產物進行毛細管電泳，根據不同的峰值檢測多態性并構建指紋圖譜，此種方法比聚丙烯酰胺凝膠電泳法更易于實現自動化讀值，實現規模化檢測，且準確可靠。然而，到目前為止國內外尚沒有利用熒光SSR標記技術對紅松無性系鑒別及指紋圖譜構建的系統性應用。

發明內容

本發明針對現有技術的不足，提供一種鑒別紅松無性系的SSR標記引物組及指紋圖譜的構建方法和應用。

本發明的一種基于毛細管電泳技術鑒別紅松無性系的SSR標記引物組，所述的引物組如下：

標記p49上游引物核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示，下游引物核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；

標記p70上游引物核苷酸序列如SEQ?ID?NO.3所示，下游引物核苷酸序列如SEQIDNO.4所示；

標記p72上游引物核苷酸序列如SEQ?ID?NO.5所示，下游引物核苷酸序列如SEQIDNO.6所示；

標記p79上游引物核苷酸序列如SEQ?ID?NO.7所示，下游引物核苷酸序列如SEQIDNO.8所示；

標記p82上游引物核苷酸序列如SEQ?ID?NO.9所示，下游引物核苷酸序列如SEQIDNO.10所示；

標記EPD11上游引物核苷酸序列如SEQ?ID?NO.11所示，下游引物核苷酸序列如SEQID?NO.12所示；

標記NFPK-34上游引物核苷酸序列如SEQ?ID?NO.13所示，下游引物核苷酸序列如SEQ?ID?NO.14所示；

標記P6*上游引物核苷酸序列如SEQ?ID?NO.15所示，下游引物核苷酸序列如SEQIDNO.16所示；