[發(fā)明專利]基于膠乳免疫比濁法測(cè)定IL-12的試劑盒及方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202211538590.4
• 申請(qǐng)日: 2022-12-02
• 公開（公告）號(hào): CN115856281A
• 公開（公告）日: 2023-03-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 郝立穎;彭勇;韓豪杰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京世紀(jì)沃德生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/531
• 分類號(hào): G01N33/531;G01N33/536;G01N33/68
• 代理公司: 北京華清迪源知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11577
• 代理人: 朱芳

本發(fā)明實(shí)施例公開了一種基于膠乳免疫比濁法測(cè)定IL?12的試劑盒及方法。本發(fā)明采用膠乳免疫比濁法測(cè)定白介素?12，不僅操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)方便快捷，而且靈敏度高、特應(yīng)性強(qiáng)、重復(fù)性好。本發(fā)明在全自動(dòng)生化分析儀上使用，檢測(cè)自動(dòng)化進(jìn)行，更加方便、快捷，節(jié)省時(shí)間，適合大批量檢測(cè)，利于在臨床上的推廣。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明實(shí)施例涉及生物分析技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種基于膠乳免疫比濁法測(cè)定IL-12的試劑盒及方法。

背景技術(shù)

白細(xì)胞介素-12，簡(jiǎn)稱白介素-12(IL-12)是一種糖蛋白，分子量為75KD，由分子量分別為40KD和35KD的兩個(gè)亞單位組成，分別稱為P40和P35，通過兩個(gè)二硫鍵結(jié)合在一起。IL-12主要是由激活的炎性細(xì)胞(單核巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞和其他抗原呈遞細(xì)胞)產(chǎn)生的，是一種具有廣泛生物學(xué)活性的小分子蛋白質(zhì)。

IL-12作為細(xì)胞免疫過程中的一個(gè)重要調(diào)節(jié)因子，在抗感染免疫和抗腫瘤免疫中有重要作用。IL-12能誘導(dǎo)T細(xì)胞增殖，有效地促進(jìn)THI產(chǎn)生，增強(qiáng)TH1活性，還能促進(jìn)NK細(xì)胞和LAK細(xì)胞的活性，兩者都能增加TNF、IFN-γ和IL-2的濃度。產(chǎn)生的TNF、IFN-γ，IL-12等細(xì)胞因子能促進(jìn)細(xì)胞的免疫反應(yīng)，也能夠輔助CTL細(xì)胞發(fā)揮殺傷功能，從而起到抗感染和抗腫瘤作用。正常情況下，機(jī)體未發(fā)生病毒、細(xì)菌感染及自身免疫反應(yīng)，機(jī)體的抗原遞呈細(xì)胞未收到刺激，白細(xì)胞介素12產(chǎn)生較少，處于低水平狀態(tài)；當(dāng)患者受到炎癥感染，免疫效應(yīng)細(xì)胞受到刺激，IL-12的分泌增加，濃度將會(huì)升高。因此IL-12可以用于炎癥的評(píng)估，如肝炎、心肌炎、腦膜炎、哮喘等均有相關(guān)研究。另外IL-12能抑制血管生成也在腫瘤方免疫治療中有重要作用，以及與腫瘤手術(shù)的聯(lián)合使用也顯著降低了腫瘤患者術(shù)后的復(fù)發(fā)。

目前IL-12的檢測(cè)方法主要是酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)，ELISA法操作相對(duì)繁瑣、檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，干擾因素較多，而在生化分析儀上利用膠乳免疫比濁法測(cè)定IL-12，操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)方便快捷、靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性也好，且該測(cè)試方法可以在各種生化分析儀上使用，具有很強(qiáng)的適用性。

發(fā)明內(nèi)容

為此，本發(fā)明實(shí)施例提供一種基于膠乳免疫比濁法測(cè)定IL-12的試劑盒及方法。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明實(shí)施例提供如下技術(shù)方案：

根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的第一方面，本發(fā)明提供一種包被有IL-12抗體的膠乳微球溶液的制備方法，包括如下步驟：

1)向緩沖液加入膠乳微球，得活化的膠乳微球體系；

2)向所述活化的膠乳微球體系加入IL-12抗體，攪拌，之后加入EDC·HCl溶液和NHS溶液，進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)，得偶聯(lián)體系；

3)向所述偶聯(lián)體系加入封閉液進(jìn)行封閉，之后進(jìn)行離心，得混合體系；

4)向所述混合體系加入儲(chǔ)存液，過夜保存，得所述包被有IL-12抗體的膠乳微球溶液；

其中，所述緩沖液由體積比為1：3～5的MES緩沖液和硼酸緩沖液組成，所述MES緩沖液以水為溶劑，包括MES·H₂O 4.5～5.0g/L、NaOH 0.2～0.5g/L，pH為6.0～6.5；所述硼酸緩沖液以水為溶劑，包括硼酸2.5～4.5g/L、四硼酸鈉0.5～1.0g/L，pH為7.2～7.3。