[發明專利]懸鉤子降糖降脂活性成分的分離、檢測方法及抗糖尿病產品中的應用

在審

• 申請號: 202211527138.8
• 申請日: 2022-11-30
• 公開（公告）號: CN115960146A
• 公開（公告）日: 2023-04-14
• 發明（設計）人: 楊芳;張宗豪;靳秀花;韓永霞;童麗;孫勝男;李文淵
• 申請（專利權）人: 青海大學
• 主分類號: C07H17/065
• 分類號: C07H17/065;C07H17/07;C07H13/08;C07H1/08;C07D493/06;A61P5/50;A61P3/10;A61P3/06;A61K31/366;A61K31/7048;A61K31/7024;A23L33/105;G01N30/02;G01N
• 代理公司: 成都華風專利事務所(普通合伙) 51223
• 代理人: 杜朗宇

1.懸鉤子降糖降脂活性成分的分離方法，其特征在于，包括以下內容：

(1)將懸鉤子醇提物與聚酰胺混合；

(2)將(1)中的混合樣品進樣至串聯的小型中壓色譜柱與聚酰胺中壓色譜柱中，分離得到五個組分Fr1、Fr2、Fr3、Fr4、Fr5；

其中，聚酰胺中壓色譜的色譜條件為：0～540min，0～100％甲醇梯度洗脫，540～700min，100％甲醇等度洗脫，流速35～45mL/min，檢測波長為205～215nm。

2.根據權利要求1所述的分離方法，其特征在于，聚酰胺中壓色譜的色譜條件為：流速40mL/min，檢測波長為210nm。

3.根據權利要求1所述的分離方法，其特征在于，將(1)中的混合樣品采用干法上樣至串聯的小型中壓色譜柱與聚酰胺中壓色譜柱中；

進一步地，五個組分出峰時間分別為：Fr1:10～70min，Fr2:71～160min，Fr3:161～238min，Fr4:239～410min，Fr5:411～700min。

4.根據權利要求1所述的分離方法，其特征在于，所述懸鉤子醇提物是由懸鉤子莖葉經乙醇提取后經過濾、濃縮得到。

5.根據權利要求1所述的分離方法，其特征在于，所述懸鉤子醇提物與聚酰胺混合后，需經干燥、研磨、過篩處理。

6.對懸鉤子中降糖降脂活性成分的檢測方法，其特征在于，包括：

S1.采用權利要求1～5任一項所述的分離方法得到的Fr4制備供試品溶液；

S2.采用高效液相色譜-質譜聯用儀對組分Fr4進行檢測，得到6種黃酮類化合物、2種酚類化合物；

其中，液相色譜條件：采用C18色譜柱，流動相A為0.1％甲酸水溶液，流動相B為0.1％甲酸乙腈，梯度洗脫條件為0min?6％B，25min?30％B，35min?60％B，40min?95％B；檢測波長為250～260nm，柱溫45～55℃。

7.根據權利要求6所述的檢測方法，其特征在于，S2中的質譜條件：采用正負離子掃描的檢測模式，離子源為：IS源；

所述正離子掃描的具體條件為：掃描范圍：m/z?100～1500；離子源溫度：600℃；離子源電壓：5500V；霧化氣GS1：50psi；霧化氣GS2：50psi；氣簾氣CUR：35psi；一級掃描去簇電壓：100V，聚焦電壓：10V；二級掃描使用TOF?MS-Product?Ion-IDA模式采集質譜數據，CID能量為-20、-40和-60V；

所述負離子掃描的具體條件為：掃描范圍：m/z?100～1500；離子源溫度：550℃；離子源電壓：-4500V；霧化氣GS1：50psi；霧化氣GS2：50psi；氣簾氣CUR：35psi；一級掃描去簇電壓：100V，聚焦電壓：10V；二級掃描使用TOF?MS-Product?Ion-IDA?模式采集質譜數據，CID能量為-20、-40和-60V；

進一步地，在出峰時間分別為14.65、16.22、16.53、17.51、18.40、19.13min收集到6種黃酮類化合物；

在出峰時間分別為13.24、15.81min收集到2種酚類化合物。

8.根據權利要求6所述的檢測方法，其特征在于，S2中的色譜柱為BEH-C18柱色譜柱，規格為：2.1mm×150mm，1.7μm；

液相色譜條件中的流速0.1～1mL/min，進樣量1～10μL，檢測波長為254nm，柱溫50℃；

進一步地，液相色譜條件中的流速0.3mL/min，進樣量3μL。

9.根據權利要求6所述的檢測方法，其特征在于，所述6種黃酮類化合物的結構式如下：

2種酚類化合物的結構式如下：

10.根據權利要求1～5任一項所述的方法分離得到的Fr4在制備抗糖尿病產品中的應用；

進一步地，所述糖尿病為I型或者II型糖尿病；

進一步地，所述產品為增加糖尿病患者胰島素敏感度、血糖和/或血脂的產品。