[發明專利]一種蜂蜜中硝基呋喃代謝物殘留量的檢測方法

在審

• 申請號: 202211517916.5
• 申請日: 2022-11-30
• 公開（公告）號: CN115856126A
• 公開（公告）日: 2023-03-28
• 發明（設計）人: 歐陽小艷;黃珊;梁善范;范云燕;周吉;黃艷桃;蒙舒婷;唐瓊;李碩;蒙德軍;韋燕燕
• 申請（專利權）人: 南寧市疾病預防控制中心
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/04;G01N30/14;G01N30/72
• 代理公司: 北京酷愛智慧知識產權代理有限公司 11514
• 代理人: 喻秦海

本發明公開了一種蜂蜜中硝基呋喃代謝物殘留量的檢測方法，涉及硝基呋喃代謝物的檢測技術領域，所述的檢測方法步驟如下：S101.取蜂蜜空白基質，加入硝基呋喃代謝物外標混合標準溶液和硝基呋喃代謝物內標混合標準溶液，進行前處理，制得硝基呋喃代謝物工作曲線標液，進行液相色譜串聯質譜分析，繪制蜂蜜中代謝物的標準曲線，得到線性方程、相關系數和線性范圍；S102.取待測蜂蜜樣品，在其中加入硝基呋喃代謝物內標混合標準溶液，進行前處理，得到前處理后的待測樣品；S103.將前處理后的待測樣品進行液相色譜串聯質譜分析，得到代謝物的峰面積；S104.將步驟S103分析得到的代謝物的峰面積，代入步驟S101得到的標準曲線，得到對應化合物的含量。

技術領域

本發明涉及硝基呋喃代謝物的檢測技術領域，具體涉及一種蜂蜜中硝基呋喃代謝物殘留量的檢測方法。

背景技術

蜂蜜主要作為營養滋補品、藥用和加工蜜餞食品及釀造蜜酒之用，也可以替代食糖作調味品，其在清熱、解毒、美容養顏等方面有特別的功效，深受大眾喜愛。然而，現有的蜂蜜產品存在抗生素殘留問題，蜜蜂在養殖過程中易受到微生物和螨蟲的污染而引起病害，蜂農為了預防蜜蜂的各種蟲病災害，往往直接飼喂或者在蜂巢中噴灑抗生素，如硝基呋喃類藥物，導致了蜂蜜中硝基呋喃類代謝物的殘留，這些藥物殘留不僅不利于人體的健康,還阻礙了蜂產品的出口。

硝基呋喃類藥物是一類具有5-硝基-2-呋喃結構的合成類廣譜抗菌藥物，最常用的硝基呋喃類藥物主要有呋喃唑酮(furazolidone)、呋喃它酮(furaltadone)、呋喃妥因(nitrofurantoin)、呋喃西林(nitrofurazone)4種，該類藥物曾在養殖業中被應用于豬、牛、水產品以及蜜蜂中用來預防和治療由沙門氏菌和埃希氏菌引起的胃腸道疾病。但是后來發現硝基呋喃類藥物具有嚴重的遺傳毒性和致畸、致癌性，因此世界各國先后頒布了禁止使用硝基呋喃類藥物的相關法令，并規定在動物源性組織中不得檢出硝基呋喃類藥物。由于硝基呋喃類藥物具有抗菌效果好，廣譜抗菌，且價格低廉等優點，在畜禽養殖業、水產養殖業以及蜜蜂養殖業的實際生產過程中仍然存在違法使用的情況，給人類健康造成極大危害。

硝基呋喃類藥物在生物體內代謝迅速，代謝的部分化合物分子與細胞膜蛋白結合成為結合態，形成代謝產物，因此對于硝基呋喃類藥物殘留的檢測方法通常是通過檢測其代謝物。呋喃唑酮、呋喃它酮，呋喃妥因、呋喃西林的代謝物分別為3-氨基-2-惡唑烷酮(3-amino-2-oxazolidine，AOZ)、5-甲基嗎啉-3-氨基-2-惡唑烷酮(5-morpholinomethyl-3-amino-2-oxazolidone，AMOZ)、1-氨基-2-內酰胺(1-aminohydantoin，AHD)、氨基脲(semicarbazide，SEM)。檢測技術主要有免疫分析法、高效液相色譜法(HPLC)、液相色譜-質譜法(LC-MS)和液相色譜-串聯質譜法(LC-MS/MS)。我國發布了關于蜂蜜中硝基呋喃類代謝物檢測的國家標準如GB/T 18932.24-2005，該標準采用2-硝基苯甲醛作為衍生試劑，采用液相色譜-串聯質譜法上機檢測，外標法定量，但是該方法耗時較長(衍生16小時)，且采用外標法定量，會因樣品前處理過程及人為誤差等原因造成定量不準確，因此，亟需開發一種既能快速檢測又能準確定量蜂蜜中硝基呋喃類代謝物的檢測方法。

發明內容

針對現有技術中的缺陷，本發明提供一種蜂蜜中硝基呋喃代謝物殘留量的檢測方法。本發明提供的方法采用超高效液相色譜-串聯三重四極桿質譜儀技術用于蜂蜜中硝基呋喃代謝物的檢測，前處理簡單易操作，檢測速度快，檢測準確度和靈敏度高、重現性好。

本發明的目的在于保護一種蜂蜜中硝基呋喃代謝物殘留量的檢測方法，步驟如下：

S101.取蜂蜜空白基質，加入硝基呋喃代謝物外標混合標準溶液和硝基呋喃代謝物內標混合標準溶液，進行前處理，制得硝基呋喃代謝物工作曲線標液，進行液相色譜串聯質譜分析，繪制蜂蜜中代謝物的標準曲線，得到線性方程、相關系數和線性范圍；