[發明專利]一種蜂蜜中硝基呋喃代謝物殘留量的檢測方法

在審

• 申請號: 202211517916.5
• 申請日: 2022-11-30
• 公開（公告）號: CN115856126A
• 公開（公告）日: 2023-03-28
• 發明（設計）人: 歐陽小艷;黃珊;梁善范;范云燕;周吉;黃艷桃;蒙舒婷;唐瓊;李碩;蒙德軍;韋燕燕
• 申請（專利權）人: 南寧市疾病預防控制中心
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/04;G01N30/14;G01N30/72
• 代理公司: 北京酷愛智慧知識產權代理有限公司 11514
• 代理人: 喻秦海

1.一種蜂蜜中硝基呋喃代謝物殘留量的檢測方法，其特征在于：所述的檢測方法步驟如下：

S101.取蜂蜜空白基質，加入硝基呋喃代謝物外標混合標準溶液和硝基呋喃代謝物內標混合標準溶液，進行前處理，制得硝基呋喃代謝物工作曲線標液，進行液相色譜串聯質譜分析，繪制蜂蜜中代謝物的標準曲線，得到線性方程、相關系數和線性范圍；

S102.取待測蜂蜜樣品，在其中加入硝基呋喃代謝物內標混合標準溶液，進行前處理，得到前處理后的待測樣品；

S103.將前處理后的待測樣品進行液相色譜串聯質譜分析，得到代謝物的峰面積；

S104.將步驟S103分析得到的代謝物的峰面積，代入步驟S101得到的標準曲線，得到對應化合物的含量；

其中，所述的硝基呋喃代謝物外標混合標準溶液中包括：AOZ、AMOZ、AHD、SEM；所述的硝基呋喃代謝物內標混合標準溶液中包括：AOZ-D₄、AMOZ-D₅、AHD-¹³C₃、SEM-HCl-(¹³C,¹⁵N₂)。

2.根據權利要求1所述的蜂蜜中硝基呋喃代謝物殘留量的檢測方法，其特征在于：所述的硝基呋喃代謝物外標混合標準溶液中AOZ、AMOZ、AHD、SEM的濃度均為100ng/mL；所述的硝基呋喃代謝物內標混合標準溶液中AOZ-D₄、AMOZ-D₅、AHD-¹³C₃、SEM-HCl-(¹³C,¹⁵N₂)的濃度均為100ng/mL。

3.根據權利要求1所述的蜂蜜中硝基呋喃代謝物殘留量的檢測方法，其特征在于：步驟S101中，所述的硝基呋喃代謝物外標混合標準溶液和硝基呋喃代謝物內標混合標準溶液的濃度比為1：1。

4.根據權利要求1所述的蜂蜜中硝基呋喃代謝物殘留量的檢測方法，其特征在于：步驟S101和步驟S102中，所述的前處理，具體步驟如下：

S201.加入5％三氯乙酸溶液，渦旋混勻，加入0.2mol/L的2-氯苯甲醛，第二次渦旋混勻，恒溫超聲，恒溫震蕩，靜置降溫，制得衍生產物溶液；

S202.在衍生產物溶液中加入0.1mol/L的磷酸氫二鉀溶液，調節pH，再加入乙酸乙酯，渦旋混勻，加入飽合NaCl溶液，第二次渦旋混勻，離心，取上層乙酸乙酯置于離心管中，在氮吹儀上水浴吹干，加入0.1％的甲酸乙腈水溶液溶解，第三次渦旋混勻后，過有機濾膜。

5.根據權利要求4所述的蜂蜜中硝基呋喃代謝物殘留量的檢測方法，其特征在于：步驟S201中，所述的恒溫超聲為45℃下超聲10min，所述的恒溫震蕩為45℃下避光震蕩衍生2h，所述的靜置降溫為靜置降溫至20-30℃。

6.根據權利要求4所述的蜂蜜中硝基呋喃代謝物殘留量的檢測方法，其特征在于：步驟S202中，所述的甲酸乙腈水溶液中甲酸、乙腈和水的體積比為0.01：1：9；所述的調節pH為采用采用2mol/L的NaOH溶液調節pH至pH值為7.4±0.2；所述的離心為以5000r/min的速率離心5mim；所述的過有機濾膜為過0.22μm有機濾膜。

7.根據權利要求4所述的蜂蜜中硝基呋喃代謝物殘留量的檢測方法，其特征在于：步驟S201和S202中，所述的5％三氯乙酸溶液、0.2mol/L的2-氯苯甲醛、0.1mol/L的磷酸氫二鉀溶液、乙酸乙酯、飽合NaCl溶液和0.1％甲酸乙腈水溶液的體積比為10：0.1：1：10：3：1。

8.根據權利要求1所述的蜂蜜中硝基呋喃代謝物殘留量的檢測方法，其特征在于：所述的液相色譜的條件：色譜柱為A VenusilMP C18色譜柱，2.1*100mm，粒度3μm；柱溫40℃，進樣體積5μL；流動相由A相+B相組成，A相為含0.1％甲酸的3mM甲酸銨溶液，B相為乙腈，流速為0.3mL/min，采用梯度洗脫。