[發明專利]一種促進體外培養細胞生成外泌體的培養基及其誘導方法

有效

• 申請號: 202211516071.8
• 申請日: 2022-11-30
• 公開（公告）號: CN115786254B
• 公開（公告）日: 2023-09-29
• 發明（設計）人: 李健;薛珂;馮婉怡;豐玫玫;王利群;楊宗繁;鄧智敏;曾勝
• 申請（專利權）人: 海南蘇生生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;C12N13/00
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 文小花

本發明提出了一種促進體外培養細胞生成外泌體的培養基及其誘導方法，每L培養基包括如下重量的組分：L?天冬酰胺7?8mg、L?谷氨酰胺360?370mg、D?葡萄糖900?1100mg、次黃嘌呤鈉1.5?3mg、亞油酸0.03?0.05mg、硫辛酸0.05?0.15mg、生物素0.003?0.004mg、氯化膽堿8?10mg、煙酰胺1.5?2.5mg、鹽酸吡哆醇1.5?2.5mg、腐胺0.07?0.09mg、丙酮酸鈉50?60mg、胸腺嘧啶0.3?0.5mg、碳酸氫鈉2300?2500mg、磷酸氫二鈉65?75mg、磷酸二氫鈉57?67mg、氯化物7400?7600mg、硫酸鹽45?55mg、硝酸鐵0.04?0.06mg、復合維生素15?25mg、復合氨基酸1000?1200mg。本發明獲得的體外培養細胞生成外泌體的培養基，可用于培育骨髓間充質干細胞、臍帶間充質干細胞、脂肪間充質干細胞、牙髓間充質干細胞或羊膜間充質干細胞，促進其外泌體的生成，獲得的外泌體數量為2.0?3.3×10¹⁰，對人臍靜脈內皮細胞的細胞活力達到83?88％。

技術領域

本發明涉及外泌體培養領域，特別涉及一種促進體外培養細胞生成外泌體的培養基及其誘導方法。

背景技術

正常細胞體外培養，所分泌的外泌體含量很少，提高細胞分泌外泌體的數量，對于后期進行外泌體的研究十分必要。

外泌體一詞的首次提出來源于1983年美國the?Johnstone?and?StahlLaboratories（約翰斯通實驗室）發表的文章上，其后，隨著電子顯微鏡的應用，人們對外泌體的功能和結構越來越清晰。外泌體是細胞間通訊的主要形式之一，并且來源不同的外泌體，所包含的物質也不相同，所表達的功效也不一樣，例如來源于間充質干細胞的外泌體主要功效是消炎、修復；來源于免疫細胞的外泌體主要功效是介導殺傷細胞和刺激免疫應答。此外，外泌體對于疾病的治療可能也會有意想不到的作用，由于有些藥物經傳統給藥途徑對于靶細胞的作用微乎其微，所以現在已經有學者把外泌體包裹藥物對疾病進行治療，經過設計之后外泌體包裹藥物能夠準確的給細胞輸送進我們想要它吸收的藥物，從而使藥物的療效達到最大化。

現有技術大部分都是外泌體應用和收集，對于促進細胞生成外泌體的研究較少，其中有使用電刺激促進細胞分泌外泌體的，有使用生長因子促進細胞分泌外泌體的，這些都有可能會使得細胞受到損傷或者殘留有相應的生長因子，使得研究者不好判斷出外泌體的準確效果。

發明內容

鑒于此，本發明的目的在于提出一種促進體外培養細胞生成外泌體的培養基及其誘導方法，提高細胞分泌外泌體的能力。

本發明的技術方案是這樣實現的：

一種促進體外培養細胞生成外泌體的培養基，每L培養基包括如下重量的組分：L-天冬酰胺7-8mg、L-谷氨酰胺360-370mg、D-葡萄糖900-1100mg、次黃嘌呤鈉1.5-3mg、亞油酸0.03-0.05mg、硫辛酸0.05-0.15mg、生物素0.003-0.004mg、氯化膽堿8-10mg、煙酰胺1.5-2.5mg、鹽酸吡哆醇1.5-2.5mg、腐胺0.07-0.09mg、丙酮酸鈉50-60mg、胸腺嘧啶0.3-0.5mg、碳酸氫鈉2300-2500mg、磷酸氫二鈉65-75mg、磷酸二氫鈉57-67mg、氯化物7400-7600mg、硫酸鹽45-55mg、硝酸鐵0.04-0.06mg、復合維生素15-25mg、復合氨基酸1000-1200mg；

所述氯化物為氯化鈣、氯化鎂、氯化鉀和氯化鈉；

所述硫酸鹽為硫酸銅、硫酸鐵和硫酸鎂；

復合氨基酸為氨基酸鹽酸鹽、甘氨酸、L-丙氨酸、天冬氨酸、L-谷氨酸、L-異亮氨酸、L-亮氨酸、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸、L-脯氨酸、L-絲氨酸、L-蘇氨酸、L-色氨酸和L-纈氨酸；

所述復合維生素為核黃素、d-泛酸鈣、葉酸、鹽酸硫胺素、肌醇和維生素B12。