[發明專利]編碼SARS-CoV-2輔助蛋白質ORF7a膜外區的基因、重組質粒

在審

• 申請號: 202211514841.5
• 申請日: 2022-11-24
• 公開（公告）號: CN116144679A
• 公開（公告）日: 2023-05-23
• 發明（設計）人: 韓正剛;陳丹;丁睿
• 申請（專利權）人: 武漢輕工大學
• 主分類號: C12N15/50
• 分類號: C12N15/50;C12N15/81;C12N15/66;C12N1/19;C07K14/165;G01N33/569;A61K39/215;A61P31/14;C12R1/84
• 代理公司: 深圳市世紀恒程知識產權代理事務所 44287
• 代理人: 高川

本發明公開一種編碼SARS?CoV?2輔助蛋白質ORF7a膜外區的基因、重組質粒及其制備方法、重組菌株、ORF7a膜外區重組蛋白質及其應用。所述編碼SARS?CoV?2輔助蛋白質ORF7a膜外區的基因的核苷酸序列如SEQ?IDNO：1所示。本發明可以低成本、高效率地制備的ORF7a膜外區重組蛋白質，制備的重組蛋白質能夠很好地被ORF7a抗體所識別，具備作為抗原用于檢測SARS?CoV?2感染者血清中抗體的功能；同時，ORF7a重組蛋白質也可以作為一種SARS?CoV?2的抗原用于SARS?CoV?2免疫接種。

技術領域

本發明涉及基因工程技術領域，具體涉及一種編碼SARS-CoV-2輔助蛋白質ORF7a膜外區的基因、重組質粒及其制備方法、重組菌株、ORF7a膜外區重組蛋白質及其應用。

背景技術

冠狀病毒(Coronavirus，CoV)是一種包膜的單鏈RNA病毒，在人類、及其它哺乳動物和鳥類中廣泛傳播，能引起呼吸系統、腸、肝及神經系統疾病。已知有7種冠狀病毒使人類致病，其中4種如Cov-229E，Cov-OC43，Cov-NL63和Cov-HKU1在人群中流行，常引起普通感冒癥狀。另外3種冠狀病毒SARS-CoV，MERS-CoV和SARS-CoV-2具有高度的危險性，會導致嚴重的肺炎甚至死亡。

有必要對SARS-CoV-2病毒進行研究，SARS-CoV-2病毒基因組編碼數個與其他已知病毒和非病毒蛋白質沒有顯著相似性的病毒特征性蛋白。這些蛋白并不是病毒復制所必須的，但可能參與病毒與宿主細胞的相互作用，被稱為病毒輔助蛋白。研究發現輔助蛋白質ORF7a是SARS-CoV-2病毒粒子表面的蛋白質之一。SARS-CoV-2感染者血清中產生高滴度的ORF7a抗體。最新研究發現SARS-CoV-2病毒能夠利用ORF7a吸附某些細胞表面分子，介導了病毒對某些種類人類細胞的感染，但是目前現有技術沒有報道或記載過關于利用輔助蛋白質ORF7a來制備疫苗。

發明內容

本發明的主要目的是提出一種SSARS-CoV-2輔助蛋白質ORF7a膜外區的基因、重組質粒及其制備方法、重組菌株、ORF7a膜外區重組蛋白質及其應用，旨在能夠低成本、高效率地制備的ORF7a膜外區重組蛋白質，制備的重組蛋白質能夠很好地被ORF7a抗體所識別。

為實現上述目的，本發明提出一種SARS-CoV-2輔助蛋白質ORF7a膜外區的基因，所述SARS-CoV-2輔助蛋白質ORF7a膜外區的基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示。

本發明還提出一種重組質粒，所述重組質粒包含如上所述的編碼SARS-CoV-2輔助蛋白質ORF7a膜外區的基因，所述重組質粒的表達載體是pPICZα。

本發明還提出一種重組質粒的制備方法，包括以下步驟：

從基因庫中找到編碼ORF7a膜外區的核苷酸序列，并進行密碼子優化設計，得到ORF7a膜外區基因；

用限制性內切酶Xho?1和Not?1將帶有Kex2位點的ORF7a膜外區基因從pU57載體上切下來，割膠回收切下的DNA片段；

將所述DNA片段通過T4?DNA連接酶與經過同樣酶切的pPICZα載體相連接，得到連接產物；

將所述連接產物轉化到大腸桿菌DH5α感受態細胞中，篩選陽性轉化子，得到陽性轉化子菌落；

將所述陽性轉化子菌落接種至含有博來霉素的LLB培養基培養后，提取質粒，得重組質粒。

本發明還提出一種重組菌株，所述重組菌株包括如上所述的重組質粒。

可選地，所述重組菌株的宿主細胞包括畢赤酵母。