[發明專利]編碼SARS-CoV-2輔助蛋白質ORF7a膜外區的基因、重組質粒在審
| 申請號： | 202211514841.5 | 申請日： | 2022-11-24 |
| 公開（公告）號： | CN116144679A | 公開（公告）日： | 2023-05-23 |
| 發明（設計）人： | 韓正剛;陳丹;丁睿 | 申請（專利權）人： | 武漢輕工大學 |
| 主分類號： | C12N15/50 | 分類號： | C12N15/50;C12N15/81;C12N15/66;C12N1/19;C07K14/165;G01N33/569;A61K39/215;A61P31/14;C12R1/84 |
| 代理公司： | 深圳市世紀恒程知識產權代理事務所 44287 | 代理人： | 高川 |
| 地址： | 430000 湖北省*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 編碼 sars cov 輔助 蛋白質 orf7a 膜外區 基因 重組 質粒 | ||
1.一種編碼SARS-CoV-2輔助蛋白質ORF7a膜外區的基因，其特征在于，所述編碼SARS-CoV-2輔助蛋白質ORF7a膜外區的基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示。
2.一種重組質粒，其特征在于，所述重組質粒包含如權利要求1所述的編碼SARS-CoV-2輔助蛋白質ORF7a膜外區的基因，所述重組質粒的表達載體是pPICZα。
3.一種如權利要求2所述重組質粒的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
從基因庫中找到編碼ORF7a膜外區的核苷酸序列，并進行密碼子優化設計，得到ORF7a膜外區基因；
用限制性內切酶Xho?1和Not?1將帶有Kex2位點的ORF7a膜外區基因從pU57載體上切下來，割膠回收切下的DNA片段；
將所述DNA片段通過T4?DNA連接酶與經過同樣酶切的pPICZα載體相連接，得到連接產物；
將所述連接產物轉化到大腸桿菌DH5α感受態細胞中，篩選陽性轉化子，得到陽性轉化子菌落；
將所述陽性轉化子菌落接種至含有博來霉素的LLB培養基中培養后，提取質粒，得重組質粒。
4.一種重組菌株，其特征在于，所述重組菌株包括如權利要求2所述的重組質粒。
5.如權利要求4所述的重組菌株，其特征在于，所述重組菌株的宿主細胞包括畢赤酵母。
6.一種ORF7a膜外區重組蛋白質，其特征在于，所述ORF7a膜外區重組蛋白質由如權利要求2所述的重組質粒編碼所得，所述ORF7a膜外區重組蛋白質的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：2所示。
7.一種免疫學檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：
采用如權利要求6所述的ORF7a膜外區重組蛋白質作為抗原，用來檢測SARS-CoV-2病毒感染者血清中的ORF7a抗體。
8.一種如權利要求6所述的ORF7a膜外區重組蛋白質作為潛在的SARS-CoV-2病毒疫苗的應用。
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