[發明專利]一種磁珠偶聯因子復合物及擴增NK細胞的方法

在審

• 申請號: 202211494461.X
• 申請日: 2022-11-25
• 公開（公告）號: CN115896018A
• 公開（公告）日: 2023-04-04
• 發明（設計）人: 王芝輝;徐娟;曹啟龍;梁少帥;董友玉;張文茜
• 申請（專利權）人: 青島海爾生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783
• 代理公司: 山東竹森智壤知識產權代理有限公司 37382
• 代理人: 劉文容

1.一種磁珠偶聯因子復合物，其特征在于，包括磁珠、4-1BBL，IL21，MICA。

2.如權利要求1所述復合物，其特征在于，磁珠粒徑為300nm-4.5um；

優選的，磁珠粒徑為300nm。

3.權利要求1-2任一項所述磁珠偶聯因子復合物的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

①將4-1BBL、IL21、MICA生長因子分別置于0.1-0.5M硼酸緩沖液中，制得生長因子溶液，將生長因子溶液與磁珠混合孵育，4℃以下旋轉混勻16-24h，孵育結束后，在無菌條件下置于磁性條件下靜置，棄去上清液，然后用封閉液洗滌后，再用封閉液重懸，4℃以下旋轉混勻16-24h，制得各單一生長因子磁珠組合物，分別為磁珠偶聯4-1BBL組合物、磁珠偶聯IL21組合物、磁珠偶聯MICA組合物；

②將磁珠偶聯4-1BBL組合物：磁珠偶聯IL21組合物：磁珠偶聯MICA組合物以磁珠數量計(0.5-2)：(0.5-2)：(0.5-2)的比例混合，制備獲得磁珠偶聯因子復合物。

4.如權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟①中，在無菌條件下置于磁性分離器上靜置；

優選的，靜置1-2min。

5.如權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟①中，封閉液的組成以每升計為：體積分數為3％人AB血清，2mM?EDTA，0.1g疊氮化鈉，余量的D-PBS緩沖液。

6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟①中，生長因子溶液與磁珠混合比例按體積比(5-10)：100，生長因子的濃度為0.05-1mg/ml。

7.權利要求1-2任一項所述磁珠偶聯因子復合物在制備NK細胞中的應用。

8.利用權利要求1-2任一項所述磁珠偶聯因子復合物制備NK細胞的方法，其特征在于，包括如下步驟：

將外周血單個核細胞接種于培養基，接種后培養基中的細胞密度為(1-3)X10⁶個/mL，并加入磁珠偶聯因子復合物，加入量按磁珠與細胞的數量比計為(1-2)：1，培養至第6-9天時，加入磁珠偶聯因子復合物，加入量按磁珠與細胞的數量比計為(4-8)：1，繼續培養至收獲NK細胞，并通過磁性吸附去除NK細胞中的磁珠偶聯因子復合物。

9.如權利要求8所述的方法，其特征在于，培養基為GT-T551?H3培養基。

10.如權利要求8所述的方法，其特征在于，繼續培養7-9天，收獲NK細胞；

優選的，通過磁性分離器吸附去除NK細胞中的磁珠偶聯因子復合物。