[發(fā)明專利]固定化酶、其制備方法及應用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202211475955.3
• 申請日: 2022-11-23
• 公開（公告）號: CN115678881A
• 公開（公告）日: 2023-02-03
• 發(fā)明（設計）人: 洪浩;詹姆斯·蓋吉;張娜;張春月;崔瑜霞;趙佳東;陳俊
• 申請（專利權）人: 凱萊英生命科學技術（天津）有限公司;凱萊英藥業(yè)（江蘇）有限公司
• 主分類號: C12N11/089
• 分類號: C12N11/089;C12N11/14;C12N13/00;C12N9/02;C12N9/04;C12N9/06;C12N9/10
• 代理公司: 北京康信知識產權代理有限責任公司 11240
• 代理人: 金田蘊

1.一種固定化酶的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1，向待固定的酶中加入PEI，然后加入無官能團修飾的Fe₃O₄顆粒，進行攪拌，所述PEI包覆所述Fe₃O₄顆粒，得到第一反應體系；

S2，向所述第一反應體系中加入蛋白沉淀劑進行蛋白的沉淀，得到第二反應體系；

S3，向所述第二反應體系中加入交聯(lián)劑交聯(lián)形成磁性交聯(lián)酶聚集體；

優(yōu)選的，所述待固定的酶為酶液。

2.根據(jù)權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述PEI的分子量為600～70000Da；

優(yōu)選的，所述PEI的pH值在8～11之間；

優(yōu)選的，所述PEI的濃度在0.5％～2.5％之間。

3.根據(jù)權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述Fe₃O₄顆粒為所述酶液質量的2％～10％。

4.根據(jù)權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述蛋白沉淀劑為無水乙醇、丙酮、乙腈、硫酸銨或聚乙二醇；

優(yōu)選的，所述聚乙二醇的分子量為2～8KDa；

優(yōu)選的，所述聚乙二醇的濃度為20％～50％，更優(yōu)選為30％。

5.根據(jù)權利要求4所述的制備方法，其特征在于，

以所述待固定的酶的酶液體積計，所述蛋白沉淀劑為2～8倍體積無水的乙醇、2～8倍體積的丙酮、2～8倍體積的乙腈和終濃度為40％～80％的硫酸銨；

優(yōu)選的，所述蛋白沉淀劑為7倍體積的無水乙醇、5倍體積的丙酮、3倍體積的乙腈，或終濃度為60％的硫酸銨。

6.根據(jù)權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述交聯(lián)劑為1％～10％的戊二醛、乙二醛、硼酸、三氯聚氰、京尼平、環(huán)氧氯丙烷或縮水甘油醚類交聯(lián)劑。

7.根據(jù)權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述S1的反應溫度為2～8℃；所述S2的反應溫度為2～8℃；所述S3的反應溫度為2～8℃；

優(yōu)選的，所述S3的產物用純化水清洗，用磁鐵分離得到所述磁性交聯(lián)酶聚集體。

8.一種固定化酶，其特征在于，所述固定化酶通過如權利要求1至7中任一項所述的制備方法制備得到。

9.根據(jù)權利要求8所述的固定化酶，其特征在于，所述固定化酶為轉氨酶、嘧啶核苷磷酸化酶、嘌呤核苷磷酸化酶、酮還原酶、烯還原酶、亞胺還原酶、氨基酸脫氫酶或環(huán)己酮單加氧酶的固定化酶；

優(yōu)選的，所述固定化酶為Aspergillus fumigatus來源的轉氨酶、Thermusthermophiles來源的嘧啶核苷磷酸化酶、Geobacillus stearothermophilus來源的嘌呤核苷磷酸化酶、Acetobacter sp.CCTCC M209061來源的酮還原酶、Saccharomycescerevisiae來源的烯還原酶、Streptomyces sp.來源的亞胺還原酶、Bacillus cereus來源的氨基酸脫氫酶或Brachymonas petroleovorans來源的環(huán)己酮單加氧酶的固定化酶。

10.如權利要求8或9所述的固定化酶在水性緩沖液反應體系或有機溶劑反應體系中的應用。