[發明專利]表達耐鹽蛋白酶的重組質粒、酵母工程菌及其發酵培養基和應用

在審

• 申請號: 202211462590.0
• 申請日: 2022-11-22
• 公開（公告）號: CN115851808A
• 公開（公告）日: 2023-03-28
• 發明（設計）人: 黃明濤;劉秀妨;徐家霖;肖寒;馮云子;趙謀明
• 申請（專利權）人: 華南理工大學
• 主分類號: C12N15/81
• 分類號: C12N15/81;C12N1/19;C12N15/57;C12P21/06;C12R1/865
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 蘇運貞

本發明公開了表達耐鹽蛋白酶的重組質粒、酵母工程菌及其發酵培養基和應用。本發明對耐鹽蛋白酶異源表達的關鍵元件進行確認，構建了表達耐鹽蛋白酶的重組質粒和酵母工程菌，該酵母工程菌表達的耐鹽蛋白酶的長期耐鹽性水平及SDS耐受性顯著提高，且能夠在高溫高鹽條件下有效顯著降解大豆分離蛋白，對傳統高鹽發酵工業中蛋白質底物的高效催化具有重要的應用價值；本發明還通過優化酶輔因子濃度，實現了耐鹽蛋白酶的高效分泌；并通過一步分離純化得到電泳純級重組耐鹽蛋白酶，純化工藝簡單、高效。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，特別涉及一種表達耐鹽蛋白酶的重組質粒、酵母工程菌及其發酵培養基和應用。

背景技術

蛋白酶在醫藥、生物化工、食品、釀造、皮革毛皮處理等領域有著非常廣泛的應用。可用于蛋白類底物的降解、處理及改性等。然而在一些高鹽環境下，由于較高鹽濃度會造成蛋白酶活性下降甚至失活，在處理過程中的催化活性受到極大抑制，從而導致反應時間延長、處理效果不佳，增加了應用成本。

目前，只有少數研究報道了可通過截短蛋白酶的結構域或者定向進化方法進行提高其耐鹽性，關于提高蛋白酶耐鹽性的相關研究仍待拓展。當前，耐鹽蛋白酶領域亟待挖掘新酶資源和開發新方法提高蛋白酶耐鹽性以滿足市場需求。

本課題組前期采用高鹽富集法從深海海底中分離出一株高產耐鹽蛋白酶的菌株Pseudomonas aeruginosa SWJSS3，并通過MALDI-TOFMS鑒定出該酶是由lasB基因編碼的偽溶素(pseudolysin)。但是，Pseudomonas aeruginosa是條件致病菌，存在引起人體出現多種急慢性疾病的風險。

發明內容

本發明的首要目的在于針對現有技術的缺點和不足，提供一種表達耐鹽蛋白酶的重組質粒。

本發明的又一目的在于提供一種表達耐鹽蛋白酶的酵母工程菌，其含有表達耐鹽蛋白酶的重組質粒。本發明采用安全生物表達系統對耐鹽蛋白酶進行異源表達，提高該耐鹽蛋白酶的工業化應用基礎。

本發明的另一目的在于提供上述表達耐鹽蛋白酶的酵母工程菌的發酵培養基。

本發明的再一目的在于提供上述表達耐鹽蛋白酶的酵母工程菌的應用。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種表達耐鹽蛋白酶的重組質粒，是在表達質粒中插入原生信號肽(signalpeptide)、原生前導肽(propeptidedomain)和酶功能區(mature domain)。

所述的原生信號肽(signal peptide)的核酸序列為(亦如SEQ ID No.1所示)：ATGAAGAAGGTTTCTACGCTTGACCTGTTGTTCGTTGCGATCATGGGTGTTTCGCCGGCCGCTTTTGCC。