[發明專利]磺胺類和四環素類抗生素的人工復合抗原、廣譜檢測抗體及其ELISA檢測方法

在審

• 申請號: 202211459087.X
• 申請日: 2022-11-17
• 公開（公告）號: CN115772215A
• 公開（公告）日: 2023-03-10
• 發明（設計）人: 劉旭東;張玉超;吳福勇;余梅
• 申請（專利權）人: 茅臺學院
• 主分類號: C07K14/765
• 分類號: C07K14/765;G01N21/31;G01N21/78;C07K14/77;C07K16/44;G01N33/53;G01N33/535
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 王立普

本發明提供了磺胺類和四環素類抗生素的人工復合抗原、廣譜檢測抗體及其ELISA檢測方法，屬于免疫分析技術領域。本發明構建磺胺類(sulfonamides,SAs)和四環素類(tetracyclines,TCs)抗生素的人工復合抗原，在人工抗原內引入磺胺片段和四環素片段，通過戊二醛連接臂將磺胺片段、四環素片段與載體蛋白連接，得到磺胺類和四環素類抗生素的人工復合抗原。此人工復合抗原經動物免疫后可以得到對SAs和TCs具有特異性、效價高的廣譜抗體，可以直接檢測樣品中SAs和TCs總量。本發明提供了一種磺胺類和四環素類抗生素總量的ELISA檢測方法，此法對SAs和TCs類抗生素線性良好。

技術領域

本發明涉及免疫分析技術領域，特別涉及磺胺類和四環素類抗生素的人工復合抗原、廣譜檢測抗體及其ELISA檢測方法。

背景技術

抗生素從生產到消費中的各個環節都有可能進入環境，環境中殘留的抗生素會導致耐藥基因的產生，改變微生物生態環境；同時由于食物鏈積累，抗生素也會對人體造成不可預計的危害。目前，抗生素對水體的污染日益嚴重，醫療衛生、畜牧養殖、水產養殖成為環境水體中抗生素的主要污染源。雖然各地污染程度大不相同，但是檢出頻率較高，在我國檢出濃度較大的抗生素種類依次為：磺胺類、四環素類、大環內酯類、喹諾酮類、氯霉素類。因此，構建快速高效的抗生素類物質的檢測方法顯得尤為重要。

目前國內外對水體中抗生素的檢測方法主要是儀器分析法，此類方法對儀器條件要求高，前處理操作相對復雜、耗時。ELISA利用抗原-抗體特異性反應，很好的彌補了儀器分析法的不足，由于不需要昂貴的儀器設備，且特異性強、靈敏度高、操作簡便快捷，在現場篩選和大量樣本的快速檢測中顯示了其獨特的優勢。

目前對于水體中抗生素的ELISA檢測方法已有研究，這些方法均采用一種載體蛋白偶聯一種半抗原制備人工抗原，通過免疫動物制備特異性多克隆/單克隆抗體，進而開發出相應的ELISA檢測方法。但抗生素種類繁多，通過一種ELISA檢測方法只能測定一種抗生素的含量，如果需要了解樣品中某類抗生素或者某幾類抗生素的總量，就需要進行很多次的測定再將結果匯總，勢必會增加工作量，延長檢測時間。

發明內容

有鑒于此，本發明目的在于提供磺胺類和四環素類抗生素的人工復合抗原、廣譜檢測抗體及其ELISA檢測方法。本發明提供的人工復合抗原能夠制備出可以同時檢測多種抗生素類物質的廣譜抗體，實現磺胺類和四環素類抗生素的同時檢測。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種人工復合抗原，具有式I所示結構：

式I中，“N-Protein-N”表示載體蛋白。

優選的，所述載體蛋白為牛血清蛋白或卵清蛋白。

本發明提供了上述人工復合抗原的制備方法，包括以下步驟：

將磺胺、戊二醛、載體蛋白、醇溶劑和緩沖溶液混合，進行第一偶聯反應，得到具有式a所示結構的化合物；

將所述具有式a所示結構的化合物、四環素和戊二醛混合，進行第二偶聯反應，得到具有式I所示結構的人工復合抗原。

優選的，所述第一偶聯反應的溫度為22～26℃，時間為4～5h；

所述第二偶聯反應的溫度為22～26℃，時間為4～5h。

本發明提供了上述人工復合抗原在制備磺胺類和四環素類抗生素廣譜檢測抗體中的應用。

本發明提供了一種磺胺類和四環素類抗生素廣譜檢測抗體，由上述人工復合抗原免疫宿主動物得到。